LOX基因转染的平滑肌祖细胞联合SP600125逆转腹主动脉瘤的实验研究

根据腹主动脉瘤(AAA)发生机制：炎性细胞浸润、平滑肌细胞(SMC)丢失、细胞外基质(ECM)合成降解失衡，提出联合c-Jun氨基末端激酶(JNK)抑制剂SP600125和赖氨酰氧化酶(LOX)基因转染的外周血平滑肌祖细胞(SPC)逆转治疗AAA的新方法。在AAA外膜下注射LOX基因转染的SPC，同时用微量泵持续在AAA外膜外给予SP600125，治疗近交系Lewis大鼠AAA模型。分析瘤体直径，炎性细胞浸润，SPC分化，SMC分布和密度，胶原纤维和弹性纤维的密度和含量，LOX、基质金属蛋白酶(MMP)和组织金属蛋白酶抑制剂(TIMP)的水平。以探讨该法可抑制炎性细胞浸润；增加SMC数量；使ECM分解减少而合成增加，达到缩小瘤体直径，逆转AAA的目的。意义：探索SPC、LOX和SP600125对动脉损伤的修复保护作用，为其应用于血管修复治疗奠定基础，为AAA的逆转治疗开拓新思路提供新方法。

目的：联合c-Jun 氨基末端激酶抑制剂SP600125和赖氨酰氧化酶(LOX)基因转染的平滑肌祖细胞(SPC)治疗腹主动脉瘤(AAA)。 .方法：.1、构建含人LOX基因的pAAV-MCS-LOX质粒，将其与pHelper、pAAV-RC共转染HEK-293 细胞制备2型腺相关病毒载体AAV2-LOX。分离兔外周血单个核细胞；用纤粘连蛋白、PDGF-BB诱导分化并鉴定SPC。AAV2-LOX转染SPC，检测LOX的表达。.2、大白兔分成3 组，分别用含0.5mol /L、0.75mol /L氯化钙和生理盐水的海绵浸润腹主动脉，制备AAA模型。观察腹主动脉扩张率及组织结构改变。.3、大白兔制备成AAA模型，分成对照组：腹主动脉外膜外通过微量泵持续给予生理盐水；SP600125组：持续给予SP600125；SPC组：外膜下注射AAV2-LOX转染的SPC；联合治疗组：同时应用SP600125和AAV2-LOX转染的SPC。观察瘤体直径、炎性细胞浸润、存活SPC的LOX的表达、平滑肌细胞(SMC)、胶原纤维和弹性纤维层、胶原蛋白Ⅰ、Ⅲ、弹性蛋白、MMP-2和MMP-9的表达。.结果：.1、重组质粒pAAV-MCS-LOX经PCR鉴定与预期结果完全一致。SPC具有SMC的生物学特性，能够表达α-SMA和calponin1。被AAV2-LOX转染的SPC可以检测到LOX的表达。.2、0.75 mol /L氯化钙制备的AAA模型具有更明显的弹性纤维破坏降解、SMC减少、腹主动脉扩张。.3、联合治疗组的动脉瘤壁内存活的可以表达LOX的SPC密度高于SPC组。对照组弹性纤维失去原有的曲度、连续性，断裂和破碎。联合治疗组这些组织结构完整清晰。对照组腹主动脉扩张率、胶原蛋白Ⅰ、Ⅲ、MMP-2和MMP-9的表达明显高于联合治疗组，而弹性纤维层和SMC层数、弹性蛋白的表达明显低于联合治疗组。.结论：1、外周血SPC是一种理想的SMC来源；AAV2 载体能够成功的将LOX基因导入SPC内。2、氯化钙浸润法是一种简单可行的AAA模型制备方法。.3、联合LOX基因、SPC和SP600125治疗AAA，可以抑制炎性细胞浸润、减少MMP的表达、减少ECM的降解，促进其合成，促进平滑肌层的修复，从而抑制AAA的形成。本研究为AAA治疗研究提供了一种新方法。