肝素化选择性脱细胞羊皮促进深二度烧伤创面愈合的实验研究

深二度烧伤是临床治疗的难点，如何促使深二度烧伤间生态组织的恢复也是研究的热点。本研究的设计是将生物敷料对创面的保护作用与肝素的药物作用相结合，以促进深二度烧伤创面的修复。肝素化选择性脱细胞羊皮是一种新型生物敷料，具备羊皮生物敷料的独特优点和更加符合皮肤生理功能的保留表皮的选择性脱细胞生物敷料，并有肝素发挥改善微循环和促进愈合的作用。该研究对该生物敷料的组织结构、物理性能和生物安全性进行检测，通过进一步实验研究探讨制备的肝素化选择性脱细胞羊皮对深二度烧伤创面微循环的改善作用和对创面愈合的影响，运用细胞凋亡技术检测创面组织细胞凋亡情况，观察LN、COX-2、VEGF在局部组织中基因、蛋白表达及其变化，了解各种检测结果的相关性，探讨该生物敷料影响深二度烧伤创面愈合的机制。该研究成果将为开发一种治疗深二度烧伤创面新型生物敷料打下基础，不断提高深二度烧伤的救治能力，有较高的经济和社会效益。

目的: 制备选择性脱细胞羊皮生物敷料，并检测其物理性能和生物安全性。研究检测肝素化选择性脱细胞羊皮生物敷料对治疗深二度烧伤创面愈合的作用机制。方法: 制作选择性羊ADM敷料，利用HE染色检查其有无明显细胞碎片残留；并用细菌真菌培养、细胞毒性实验和透气性等实验检测生物安全性。将豚鼠制做深二度烧伤模型，随机分为碘伏纱布治疗组、猪ADM治疗组、选择性羊ADM治疗组和肝素化选择性羊ADM治疗组。运用印度墨汁灌注染色观察不同时间段创面微循环充盈度。将Wistar大鼠做深二度烫伤，分组和豚鼠烧伤分组一样，在术后观察各组创面愈合率，同时做组织病理学检测，Realtime PCR、免疫组化和western-blot检测VEGF、LN、COX-2和CD34的mRNA和蛋白的表达变化；运用细胞凋亡技术检测组织细胞凋亡情况。结果: 选择性羊ADM未见细胞和血管，未检测出细菌和真菌且对细胞生长活力无影响。豚鼠深二度烧伤后的24、48、72h，印度墨汁灌注检测发现，肝素化选择性羊ADM组的创面微循环灌注较其它三组好（P<0.05）。烧伤后14d、21d、28d时，猪ADM组、选择性羊ADM组和肝素化选择性羊ADM组的创面愈合率均优于碘伏纱布组（P＜0.05）。在烧伤后14-28d，各组创面组织中的成纤维细胞凋亡数有明显的增加，其中尤以肝素化羊ADM治疗组在术后28d的凋亡数较多（P＜0.05）。三组生物敷料与碘伏纱布组比较均促进了VEGF的表达，尤以在肝素化选择性羊ADM组对VEGF的促进更明显。CD34作为检测血管微密度的一种标记，和VEGF的表达趋势一致。COX-2在各组的表达以碘伏纱布组3d最高，随后逐渐回落，其它三组的趋势也类似但表达量较低。LN在碘伏组内28d蛋白表达较高，而肝素化选择性羊ADM组、猪ADM组和选择性羊ADM组均在21d表达较高，但肝素化选择性羊ADM组3d、7d时LN表达较猪ADM组和选择性羊ADM组强。结论: 成功制作了选择性脱细胞羊皮基质。三种真皮基质治疗深二度烧伤，以肝素化选择性羊ADM在促进创面愈合率方面的效果更好。 肝素化选择性羊ADM在烧伤创面愈合后期，较其它组更加的诱导或促进创面肉芽组织中成纤维细胞的细胞凋亡，减少瘢痕的形成。 肝素化选择性羊ADM促进创面组织表达VEGF,LN和CD34，减弱炎症反应相关因子COX-2的表达，从而促进创面组织愈合。