Neuritin对蛛网膜下腔出血后内质网应激通路影响的研究

SAH is cerebrovascular accident disease with high mortality and disability. Early brain injury（EBI） maybe the most important reason which contribut to mortality and disability of patient with SAH as recently reported. Neuritin could reduced apoptosis in the brain,as we found in the past. Thus, we suppose that Neuritin alleviates early brain injury after SAH by endoplasmic reticulum stress. SAH rat model and neurons of rat cerebral cortex in vitro will be investigated in this project,with Neuritin injects in lateral ventricles, mRNA and protein expression of factors relate to endoplasmic reticulum stress will be researched by Real-time PCR and Western-blot; moreover, cerebral edema relate to EBI,BBB permeability,cerebral cortex cell apoptosis will be respectively deteceted by dry-wet method,Evans bule extravasation,cell flow cytomertry and Scores of neurological scale.We'll initially reveal the protection mechanism of Neuritin on early brain injury after SAH and provide the basic theory of clinical therapy.

蛛网膜下腔出血是脑血管意外中致死率和致残率较高的疾病。近年来，研究发现早期脑损伤可能是导致患者死亡和致残的主要原因。以往研究中我们发现：在蛛网膜下腔出血后Neuritin可减轻脑组织凋亡。因此，我们假设：Neuritin是否通过内质网应激途径抑制SAH后早期脑损伤。本项目以SAH大鼠模型和体外大鼠皮层神经元细胞为研究对象，侧脑室注射 Neuritin，利用Real-time PCR和Western-blot技术检测内质网应激相关分子的mRNA和蛋白表达；同时，利用干湿重法、Evans蓝外渗量法、细胞流式技术和神经功能评分法检测与早期脑损伤相关的脑水肿、血脑屏障通透性、皮层神经细胞凋亡和神经功能。初步揭示neuritin对蛛网膜下腔出血后早期脑损伤的保护机制，为临床治疗提供基础理论。

本项目通过研究SAH后早期脑损伤过程中内质网应激通路参与了神经元细胞凋亡和神经营养因子neuritin对内质网应激相关因子的下调作用进而抑制神经细胞的凋亡。初步明确内质网应激通路在SAH后早期脑损伤诱发的细胞凋亡的作用以及neuritin 对蛛网膜下腔出血后早期脑损伤的保护机制。.课题首先构建了SD大鼠的SAH模型，采用视交叉前池注血法，构建大鼠模型。在3、6、12、24、48、72h 对模型的大脑皮层中的p-PERK、ATF4、CHOP、p-eIF2α、IRE1、XBP1、caspase-12、ASK1和GRP78基因和蛋白进行了检测和分析，结果显示随着SAH的病程的延长，p-PERK、ATF4、CHOP、p-eIF2α、IRE1、XBP1、caspase-12、ASK1和GRP78表达均呈现先增高再降低的趋势。.通过再次构建SD大鼠的SAH模型，并应用神经营养因子neuritin侧脑室注射，构建SAH+neurtin组。观察内质网应激相关因子（p-PERK、ATF4、CHOP、p-eIF2α、IRE1、XBP1、caspase-12、ASK1和GRP78）的表达变化、TUNEL、神经行为学评分、脑水肿、血脑屏障通透性的检测。结果显示，SAH+neurtin组内质网应激相关因子的表达水平均比SAH组有所降低，TUNEL凋亡细胞数、神经行为学评分、脑水肿、血脑屏障通透性均比SAH组有所改善.本课题又通过体外原代培养大鼠皮层神经元，采用氧糖剥夺再灌注法构建细胞模型，检测内质网应激相关因子（p-PERK、ATF4、CHOP、p-eIF2α、IRE1、XBP1、caspase-12、ASK1和GRP78）的表达变化，发现其均存在先增长后降低的趋势。给予不同浓度的neuritin，结果显示200ng/mL neuritin可以显著抑制内质网应激相关因子的表达水平，并且降低皮层神经元凋亡率以及改善粗面内质网超微结构。.通过本次研究，我们初步明确了内质网应激相关因子（p-PERK、ATF4、CHOP、p-eIF2α、IRE1、XBP1、caspase-12、ASK1和GRP78）在SAH后的表达变化情况以及神经营养因子neuritin能够抑制SAH后内质网应激相关因子介导的细胞凋亡，对SAH后早期脑损伤起保护作用。对蛛网膜下腔出血后早期脑损伤的病理生理机制提供新的认识，为今后开