iNOS-NO通路在蛛网膜下腔出血后早期脑损伤中的机制研究

除血管痉挛外，早期脑损伤(EBI)也是蛛网膜下腔出血(SAH)病人致死致残的主要原因。在SAH后脑组织异常表达iNOS，产生大量的NO，然而，iNOS-NO通路在SAH后EBI中的机制尚不清楚。本项目拟研究iNOS-NO通路在SAH后EBI中的作用：首先观察SAH后脑组织NO和iNOS的变化规律，利用激光共聚焦显微镜共定位技术阐明SAH后脑组织内过量NO的来源及损伤靶点细胞。通过电镜、TUNEL染色、Western Blot、Realtime-PCR等技术探讨过量的NO是否与神经细胞凋亡有关。进一步利用iNOS基因敲除小鼠验证iNOS-NO通路的诱导神经细胞凋亡作用。并观察iNOS上游触发因子和下游效应因子在SAH后EBI中的变化，从分子水平完整揭示iNOS-NO通路在EBI发生中的机制。基于以上结果，有助于早期针对性的干预iNOS-NO通路，达到防治EBI的目的，改善SAH 病人的预后。

项目完成情况：成功建立了稳定的蛛网膜下腔出血模型，对SAH大鼠脑组织内一氧化氮（NO）含量进行了检测，发现脑组织内一氧化氮含量增高。结合以前实验，对脑组织一氧化氮合酶（iNOS）基因进行了RT-PCR检测，并对相关的蛋白及基因进行检测，同时对大鼠组织行电镜检查，发现大鼠血管内皮细胞凋亡增加。利用Long Non-coding RNA Array的方法对蛛网膜下腔出血后24小时的长链非编码RNA和mRNA表达谱分别做了分析，我们发现同假手术组相比较，蛛网膜下腔出血24小时后有144个长链非编码RNA表达水平降低，64个长链非编码RNA表达水平升高。有221个mRNAs表达水平升高，181个mRNAs表达水平降低。在此基础上，KEGG和GO数据库分别对差异表达的mRNA做了通路和功能分析。GO数据表明the regulation of system process, serine-type endopeptidase activity and extra cellular region是三个富集程度最高的GO terms。KEGG通路分析表明neuroactive ligand-receptor interaction 和leishmaniasis是两个富集程度最高的通路。我们进一步发现iNOS在leishmaniasis 通路里面可能具有重要作用。.成果：接收PROOF一篇，接收后小修一篇。.工作展望：我们准备对差异表达的数百个长链非编码RNA和mRNA进一步分析，对涉及到炎症及凋亡的差异基因进行分析，进一步完善蛛网膜下腔出血后早期脑损伤的机制研究。