Hif-1α在眼表鳞状上皮化生中的功能研究

鳞状上皮化生是多种眼表疾病共同的病理学改变，主要特征为上皮细胞的高增殖和异常分化。我们前期研究发现，Hif-1 α表达与部分眼表鳞状化生疾病呈负相关。为了深入研究HIf-1 α影响眼表鳞状化生类疾病的分子机理，本项目将进行如下研究(一)收集多种眼表疾病手术标本，分析病变组织中HIf-1α及相关基因在角膜鳞状化生组织中的改变。（二）在体外培养的角结膜组织以慢病毒侵染过表达或敲低Hif-1α，检测处理后角结膜上皮增殖分化状态。(三)应用HIf-1α化学诱导剂DFO处理眼表鳞状化生动物模型，检测处理后角结膜的生理生化改变，探讨DFO用于眼表鳞状化生疾病的可能。(四)构建K10启动子-报告基因载体，单独或共同过表达Hif-1α和C/EBPα后检测报告基因活性，分析Hif-1α抑制角结膜上皮异常分化的机理。本研究的有助于阐明眼表鳞状上皮化生的分子机理，也可为该种疾病的治疗提供新的思路和方法。

本课题的目的在于探讨Hif-1α基因对眼表上皮鳞状上皮化生的影响。在37度经空气暴露培养构建TKE2细胞发生鳞状上皮化生模型中，我们以2%的氧气诱导细胞中Hif-1a的表达，通过免疫荧光和实时荧光PCR检测发现Hif-1a可促进角膜上皮干细胞中增殖相关基因K14、p63等的表达，同时抑制角膜上皮向皮肤上皮的转分化，进一步的研究表明Hif-1a可抑制Wnt/b-Catenin信号通路的异常活化，从而抑制眼表鳞状化生样改变。本课题还开发了新型的角膜缘上皮干细胞保存方法，与传统浸没保存角膜组织的方法相比，低温空气暴露可更好保护上皮结构完整，维持上皮干细胞增殖能力，并抑制长期浸没引发的细胞凋亡，应用保存角膜缘组织对眼表失代偿患者行移植手术可恢复眼表正常微环境。