Wnt信号通路在角结膜鳞状上皮化生发生中的作用及其机制研究

鳞状上皮化生在组织学上表现为上皮细胞的过度增生和异常分化，是多种眼表面疾病的重要病理改变，目前对鳞状上皮化生的发生机制仍不甚清楚。Wnt信号传导通路与细胞的增殖及分化密切相关，我们在前期实验中发现，鳞状上皮化生的眼表组织多伴有β-catenin的表达上调和磷酸化水平改变，提示Wnt信号通路的异常激活可能引发鳞状上皮化生。为了深入研究Wnt信号通路参与眼表疾病发生的分子机理，本项目以液气界面培养法体外诱导人角结膜组织鳞状上皮化生，培养过程中人为抑制（添加抑制剂Dkk1）或活化（添加Wnt3a、慢病毒转染过表达β-catenin）Wnt信号通路，并在体外培养的严重眼表鳞状上皮化生病变组织中添加Wnt通路抑制剂，通过检测处理后上皮组织的增殖与分化状态来分析Wnt信号通路在眼表鳞状上皮化生中的作用。本研究不仅有助于阐明角结膜上皮鳞状化生的分子机理，而且可为严重眼表疾病的临床治疗提供全新的思路和方法

本研究采用HE染色、免疫组织化学、实时荧光PCR、Western blot等方法研究在体、离体和细胞水平的角结膜鳞状上皮化生模型，首次发现：.（1）国内外首次发现低氧环境可抑制体外培养的人角膜上皮干细胞中Wnt信号通路的激活，提示Wnt信号通路活化/抑制可能在角结膜鳞状上皮化生的发生、发展中起重要作用。.（2）国内外首次构建以低温空气暴露的方式保存角膜缘组织，可有效的维持角膜上皮干细胞的增殖能力、正常细胞表型；这样的方法可以用在眼组织库处理及制作组织工程角膜上皮。.（3）国内首次发现翼状胬肉上皮异常分化，以眼表上皮鳞状化生伴随增殖为主，破坏泪膜稳定，从而影响患者眼表功能。. 上述结果证实了我们提出“Wnt信号传导通路可能参与鳞状上皮化生的异常分化与增殖”的假说，为眼表疾病的防治提供一个新方向。