miR-146a调节B细胞异常活化参与类风湿关节炎发病机制研究

Dysregulated B cell activation and increased auto-antibody production are critically involved in the pathogenesis of rheumatoid arthritis. Our previous studies detected high levels of miR-146a in B cells purified from synovial fluid. Moreover, we found enlarged spleen and lymph nodes with increased sizes of germinal centers and increased serum levels of Ig in miR-146a transgenic mice. Based on these findings, we hypothesize that miR-146a modulates B cell activation and contributes to RA pathogenesis. In this study, we will determine the molecular mechanisms underlying miR-146a-mediated B cell activation and identify its target genes. Using a mouse K/BxN model with autoimmune arthritis, we will investigate whether ansd how B cells with upregulated miR-146a expression contribute to autoimune progression. Furthermore, we will examine the role of miR-146a in modulating B cell functions from RA patients and normal subjects and elucidate the molecular mechanisms by which miR-146-mediated B cell activation involves synovial inflammation in RA. Together, our proposed studies will provide further insight in understanding autoimmune progression and may facilitate the development of new treatment strategy for RA.

B细胞异常活化、分泌大量自身抗体是类风湿关节炎（RA）免疫病理机制的重要环节。前期研究发现RA滑液B细胞高表达miR-146a，miR-146a转基因小鼠呈现淋巴结增大、脾大、生发中心增多、血清Ig增高等表现，提示B细胞异常活化，我们推测miR-146a通过诱导了B细胞异常活化最终参与了RA的发病机制。为证实这一假说，我们拟进行如下研究：通过转基因小鼠分析miR-146a调节B细胞异常活化的分子机制、鉴定靶基因和下游调控通路；以嵌合鼠和K/BxN小鼠为模型，探讨高表达miR-146a的B细胞是否参与自身免疫性关节炎的发生和进展；分析miR-146a对RA病人和正常人B细胞活化的影响，进一步从基因翻译调控的角度，阐明miR-146a调节B细胞活化及参与RA滑膜炎症的分子机制，本研究的完成有助于深入理解RA的炎症过程，并为RA的治疗策略提供了新的线索。

miRNA是通过翻译抑制而精细调节基因功能的一大类重要的小分子RNA。我们的前期研究发现，在类风湿关节炎病人的CD4+T细胞中，miR-146a的表达水平显著增高，其他研究者也发现，在肿瘤和其他自身免疫性疾病如干燥综合症和银屑病中，miR-146a的表达也有类似的增高。然而，miR-146a在天然免疫中发挥的抑制作用并不能解释其在自身免疫疾病中的功能。因此，为了探讨miR-146a在自身免疫疾病中的具体功能，我们构建了miR-146a转基因小鼠，并分析了此TG小鼠的表型、鉴定了其在B细胞中的靶基因。研究发现，幼龄的TG小鼠即出现了类似人自身免疫性淋巴细胞增多综合症（ALPS）的免疫功能异常：包括淋巴结和脾脏增大、肝和肺的淋巴细胞浸润、外周血中DNT细胞数量增高、血清IgG水平增加。进一步通过不同亚群免疫细胞的过继回输实验证实，B细胞是导致ALPS的主要原因，Fas是miR-146a在B细胞中的靶基因，生发中心B细胞的Fas表达明显降低，并且高表达miR-146a的B细胞可以促进T细胞的稳态增殖。本研究揭示了miR-146a促进体内淋巴细胞稳态增殖的新功能，并证实miR-146a参与了自身免疫炎症反应的发生。基于此，我们通过进一步生物信息学分析，推测在miR-146a缺陷小鼠，由于影响了天然免疫细胞中NF-Kb通路的功能导致了自身免疫反应，而高表达miR-146a则促进了小鼠T、B细胞的稳态增殖并导致了ALPS样的改变。上述研究结果为阐明ALPS的病理机制、寻找新的治疗靶点提供了线索。