IL-10下降损害子宫腺肌症不孕患者内膜容受性的机制研究

The uterine endometrial receptivity in adenomyosis women is impaired. But the mechanism is still unclear. Our previous studies demonstrated that expression of anti-inflammatory cytokine IL-10 and endometrial receptivity marker HOXA10 are markedly down-regulated in the endometrium of adenomyosis women. We identified a conserved STAT3 binding element (TTCCA/TGGAA) within the HOXA10 core promoter region. At the same time, STAT3 can be activated by IL-10. Therefore, our hypothesis is that in adenomyosis patients, dysregulated expression of IL-10 inhibits the activation of STAT3 which leads to the reduced HOXA10 expression, resulting in a decrease in the endometrial receptivity. At present, GnRHa treatment for 3-6 months before ovarian stimulation can contribute to the establishment of successful pregnancies in adenomyosis patients in IVF. However, the mechanism is unknown. Here, the main focus of this study was on the role of IL-10 impaired endometrial receptivity by regulating the expression of HOXA10 through STAT3. We employ in vitro experiments and adenomyosis mouse models to elucidate whether GnRHa treatment improve the endometrial receptivity by up-regulating anti-inflammatory cytokine IL-10 levels. Our study aims to clarify the mechanism of impaired uterine endometrial receptivity in adenomyosis women and explore whether IL-10 can be considered as a novel evaluating criterion for GnRHa curative effect.

子宫腺肌症不孕患者内膜容受性下降，但其机制不清。前期临床调查发现腺肌症不孕患者子宫内膜中抑炎因子IL-10及内膜容受性标志分子HOXA10表达均显著降低。并且，HOXA10启动子区含有种植关键分子STAT3保守结合序列TTCCA/TGGAA；同时，STAT3可以被IL-10激活。因此，我们推测子宫腺肌症不孕患者内膜抑炎因子IL-10的水平下降，导致通过STAT3途径产生的HOXA10水平下降，进而损害内膜容受性。目前，子宫腺肌症不孕患者在IVF超促排卵前应用3-6个月长效GnRHa治疗能显著增加子宫内膜容受性，提高临床妊娠率，但其机制不明。本课题将重点研究IL-10通过STAT3调控HOXA10的机制，并通过体外及动物实验研究GnRHa治疗是否通过提高IL-10水平改善子宫内膜容受性。以期阐明子宫腺肌症不孕患者内膜容受性下降的机制，并探讨IL-10用于评价GnRHa治疗效果的可能性。

项目的背景：子宫腺肌病是子宫内膜向肌层浸润并弥漫性生长，表现为子宫肌层中出现异位的内膜和腺体，伴随周围肌层细胞肥大和增生。近年来，子宫腺肌病的发病率呈年轻化及上升趋势，在自然人群中的发病率达 8-27%，在不孕中心就诊患者中 的发病率达 54%。我们的前期研究以及文献资料显示子宫腺肌病不孕患者借助辅助生殖技术治疗时，子宫对胚胎的容受性下降，导致种植率降低和流产率增高，但其机制至今不明。.主要研究内容：1、子宫内膜指标的检测 应用Western Blot及免疫组织化学方法检测子宫腺肌病与对照组患者子宫内膜中IL-10、HOXA10、STAT3及p-STAT3的表达水平，并进行相关性分析。2、体外实验 应用Western Blot方法检测IL-10重组蛋白刺激Ishikawa细胞后p-STAT3及HOXA10的表达水平，以及用p-STAT3抑制剂预处理Ishikawa 细胞后，p-STAT3及HOXA10的表达变化。并且，应用JAR细胞球-单层Ishikawa细胞粘附模型进一步探究IL-10对胚胎粘附的影响。ICR 小鼠腺肌病模型的建立与表型鉴定。3、实验动物在体实验 通过他莫昔芬构建子宫腺肌病模型小鼠，检测模型小鼠子宫组织中IL-10及HOXA10表达水平变化。.研究结果： 1、子宫腺肌病不孕患者子宫内膜IL-10及HOXA10表达均显著降低，且二者呈正相关 (r=0.47, P<0.05)。子宫腺肌病不孕患者内膜p-STAT3表达量显著降低，并与IL-10表达呈正相关 (r=0.52, P<0.05)。2、IL-10通过激活STAT3磷酸化而刺激Ishikawa细胞HOXA10表达，且呈浓度及时间依赖性。IL-10可以促进JAR细胞球粘附于Ishikawa细胞比例，此作用可被p-STAT3抑制剂逆转。3、子宫腺肌病模型构建后于2月龄收取子宫组织，切片HE染色显示内膜侵入肌层；进一步免疫组化α-SMA及E-cadherin证实腺肌病模型建立成功；腺肌病模型小鼠子宫组织切片免疫组化检测发现IL-10、p-STAT3及HOXA10表达均显著降低(P<0.05)。.科学意义：研究了子宫腺肌病不孕患者IL-10水平下降导致通过STAT3途径产生的HOXA10水平下降，进而影响内膜容受性的机制，为临床改善子宫腺肌病患者助孕的妊娠结局提供了研究基础与新思路。