针灸干预不孕症子宫内膜容受性基因靶点筛选与生物信息学挖掘

We have accumulated some earlier research experiences by applying acupuncture into the infertility and IVF-ET's clinic treatment since 2007. Combining with the research progresses overseas and domestic, and with the overall consideration of the effects of treatment in which we have tried to use acupuncture intervening and IVF-ET to treat the infertility with endometrial low receptivity patients unsuccessfully, we have set a randomized controlled trial, and used high-throughput gene chip technology to screen the gene targets under the acupuncture treatment of endometrial receptivity. And we not only use the bioinformatics to analyze acupuncture intervening endometrial implantation window 'functions and interactive networks of the potential biomakers, but also use RT-PCR, Western blot and immunofluorence to test the known target genes' mRNA and protein expression in our screening. we will discuss the characteristics of acupuncture's function in adjusting the entirety at the genetic level and try to reveal the possible molecula mechanism of acupuncture in improving the endometrial receptivity. So that we may provide a reliable scientific basis for clinical application of acupuncture in infertility and assisted reproductive technology, and also a new research direction and research train of thought for further study of acupuncture in infertility molecular intervention mechanism.

课题组自2007年始将针灸疗法介入到不孕症及IVF-ET的临床治疗中，积累了一定的前期研究基础。结合国内外研究进展，本研究拟通过随机对照，在综合评价针灸干预接受IVF-ET治疗的子宫内膜低容受性不孕症患者治疗效应基础上，采用高通量基因芯片技术，筛选子宫内膜容受性的针灸作用基因靶点；利用生物信息学方法，分析针灸干预子宫内膜容受窗期差异表达基因的功能及网络；并应用RT-PCR、Western blot和免疫组化技术，对筛选出的具有已知生物学意义的靶点基因mRNA及蛋白表达进行检测，探讨针灸在基因水平发挥整体调节作用的特点，揭示针灸改善子宫内膜容受性可能的分子作用机制，以期为针灸在不孕症和辅助生育技术中的临床应用提供可靠的科学依据，也为进一步研究针灸对不孕症的分子干预机制提供新的研究方向和研究思路。

背景：针灸介入IVF-ET的疗效已被国内外生殖医学界初步肯定。但针灸干预的分子作用机制尚不明晰。.方法与结果：1.针灸干预对接受IVF-ET治疗的子宫内膜低容受性不孕症患者治疗效应观察：治疗组在移植周期前两个月经周期首日至种植当日接受针灸治疗，隔日一次。结果显示：生化妊娠率、临床妊娠率治疗组均显著优于对照组；移植周期HCG日血清雌激素治疗组显著高于对照组，孕激素治疗组显著低于对照组；移植日子宫A型内膜占比治疗组优于对照组。2.准备周期容受窗期人子宫内膜全转录组测序及生物信息学方法分析：鉴定出差异表达的317个mRNAs、82个ncRNAs、39个miRNAs、86个circRNAs。DE-ncRNAs与细胞运输相关，如ATP水解偶联质子转运，空泡酸化，转铁蛋白转运和质子转运及代谢过程，包括小分子代谢过程和代谢过程；富集在11条通路，包括氧化磷酸化、突触囊泡循环、矿物质吸收和代谢途径。DE-miRNAs与转录相关，如DNA模板化转录的调控和DNA模板化转录的正向调控；富集在内吞作用、轴突引导、催产素信号通路、Hippo通路和雌激素信号通路。DE-circRNAs与染色质修饰、参与展开蛋白反应的RNA聚合酶II启动子转录正向调控、氧化DNA去甲基化、RNA聚合酶II启动子对缺氧反应转录的调控、平滑肌细胞分化的调控有关；CC层面为核质、核仁、细胞核、组蛋白乙酰转移酶复合物和环状片层；MF层面为甲基胞嘧啶双氧酶活性、染色质结合、锌离子结合、组蛋白结合和蛋白结合；KEGG通路分析识别出内质网蛋白质加工、芳香化合物降解、带状菌病、雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路、上皮细胞细菌侵袭和前列腺癌通路。3. 光镜及扫描电镜下观察大鼠子宫内膜在容受窗期的组织形态学：电针可以增加薄型子宫内膜的厚度及血管数、减轻薄型子宫内膜的纤维化程度并显著增加其胞饮突的数量。.结论：针灸可提高子宫内膜低容受性不孕症患者IVF-ET治疗的生化和临床妊娠率，与针灸治疗改善子宫内膜形态结构，调整血清甾体类性激素平衡有关。其机制与针灸在基因水平多靶点、多通路的整体调节作用有关。.科学意义：本研究为针灸疗法在不孕症和IVF-ET临床的进一步推广应用提供了科学依据，也为进一步研究针灸对不孕症的分子干预机制提供新的研究方向和研究思路。