去甲斑蝥素通过影响Hippo/YAP信号通路诱导骨肉瘤细胞凋亡和抑制血管拟态形成机制的研究

Although neoadjuvant chemotherapy in patients with long-term survival has greatly improved, but the side effects of chemotherapy drugs exist obvious and multi-drug resistance, often causing clinical forced to reduction or withdrawal. In recent years, a series of studies have shown that the induced tumor cell apoptosis and interrupt source of nutrition is one of the two ideal targets for tumor therapy. Hippo/Yap signaling pathway is a kind of cell division and the control switch of death, may be closely related with human tumorigenesis. Prior to armor cantharidin on a variety of experimental studies have shown that tumor cells have obvious damage or inhibition, rarely make the news but the mechanisms of resistance of osteosarcoma. The experiment in obtaining to armor cantharidin has obvious inhibition of osteosarcoma cells (U2OS) based on growth and proliferation of experiment, proposed the methods of cell and molecular biology, further clarify to armor cantharidin by influencing the Hippo/Yap U2OS signaling pathways induced apoptosis and the mechanism of formation of the inhibition of vascular mimicry. And through to armor cantharidin on lotus osteosarcoma in nude mice in vivo study of tumor suppression function, assessment to curative effect and side effects of cantharidin, for armor cantharidin the clinical application of treatment of osteosarcoma to provide necessary theoretical basis.

骨肉瘤是一种多见于儿童和青少年的原发性恶性骨肿瘤。虽然新辅助化疗使患者的长期生存率有了较大的提高，但化疗药物存在着明显的毒副作用及多药耐药性，往往造成临床被迫减量或停药。近年来一系列研究表明，诱导肿瘤细胞凋亡和中断肿瘤营养来源是目前肿瘤治疗的二大理想靶点。Hippo/Yap信号通路是一种细胞分裂和死亡的控制开关，可能与人类的肿瘤发生密切相关。前期研究表明去甲斑蝥素对多种实验性肿瘤细胞有明显的杀伤或抑制作用，但其抗骨肉瘤作用机制鲜有报道。本项目在获得去甲斑蝥素具有明显的抑制骨肉瘤细胞（U2OS）生长、增殖的预实验基础上，拟采用细胞和分子生物学等方法，进一步阐明去甲斑蝥素通过影响Hippo/Yap信号通路诱导U2OS 凋亡和抑制血管拟态形成的机理。并通过去甲斑蝥素对荷骨肉瘤裸鼠抑瘤作用的体内研究，评估去甲斑蝥素的疗效和毒副作用，为去甲斑蝥素治疗骨肉瘤的临床应用提供必要的理论依据。

骨肉瘤是一种多见于儿童和青少年的原发性恶性骨肿瘤。虽然新辅助化疗使患者长期生存率有所提高，但化疗药物存在着明显的毒副作用及多药耐药性，往往造成临床被迫减量或停药。近年来研究表明，诱导肿瘤细胞凋亡和中断肿瘤营养来源是目前肿瘤治疗的二大理想靶点。Hippo/Yap 信号通路是一种细胞分裂和死亡的控制开关，可能与人类的肿瘤发生密切相关。前期研究表明去甲斑蝥素对多种肿瘤细胞有明显杀伤或抑制作用，但其抗骨肉瘤机制鲜有报道。本实验在获得去甲斑蝥素具有明显抑制骨肉瘤细胞（U2OS）生长、增殖的预实验基础上，采用流式细胞仪、原位DNA断裂点标记（TUNEL法）等方法对去甲斑蝥素诱导骨肉瘤细胞凋亡和周期进行定性和定量分析。采用Westerm Blot 检测、免疫组化等方法，检测去甲斑蝥素干预骨肉瘤细胞后Hippo/Yap蛋白表达，着重阐明去甲斑蝥素诱导骨肉瘤细胞凋亡和抑制血管生成拟态的分子机理，以及Hippo/Yap蛋白与二者的相互关系。并且通过去甲斑蝥素对荷骨肉瘤裸鼠抑瘤作用的体内研究，评估去甲斑蝥素的疗效和毒副作用。结果显示：1、发现小剂量去甲斑蝥素具有诱导细胞凋亡的作用，并且阻滞细胞周期于S 期、从而达到诱导细胞凋亡。 (2)去甲斑蝥素通过下调Hippo/Yap 信号通道上ERK1/2/AKT 的磷酸化作用从而达到诱导U2OS 凋亡和抑制血管拟态形成。 (3)去甲斑蝥素低、中、高剂量组骨髓有核细胞的数量与生理盐水组的差异无统计学意义，但5-fu组则明显减少，说明5-fu有骨髓抑制的副作用，而去甲斑蝥素则没有。在整个实验过程中，没有裸鼠发生意外死亡。病理切片结果显示各治疗组裸鼠的心、肝、脾、肺重要器官均未见明显出血、坏死及肿瘤转移灶。但高剂量组肾脏可见肾小管胞质水肿样变，肾细胞间隙炎性细胞聚集。以上实验结果为去甲斑蝥素治疗骨肉瘤的临床应用提供理论依据。