基于IFITM1/Wnt/β-catenin信号通路调控骨肉瘤细胞恶性增殖探讨抑瘤 汤抗骨肉瘤的机制

Osteosarcoma (OS) is one of the malignant tumors which most likely to occur in adolescents. The Characteristics of occurrence and development is malignant proliferation and metastasis.At present, there is a lack of effective treatment measures.Yiliu soup Shows good results in clinical.But its mechanism is not clear.In the previous work, the IFITM1 was found to have high expression in the OS.After transfect U2OS with RNAi IFITM1 lentivirus,cell proliferation and migration decreased and apoptosis increased.Confirmed by the access to.information, IFITM1 play an important role in the occurrence and development of all kinds tumors.Its expression may be regulated by the Wnt/β-catenin signaling pathway.The activation of Wnt/β-catenin signaling pathway is closely related to the proliferation of tumors.So we hypothesized that activation of the Wnt/β-catenin pathway is essential for the malignant proliferation of OS.On the basis of the above,we hope to summarize the correlation of IFITM1 with the tumor occurrence, surgical classification and prognosis by the retrospective analysis of large samples.At the same time, Further explore the molecular mechanism of IFITM1/Wnt/β-catnin pathway regulation OS malignant proliferation and Yiliu soup treatment OS in the cell and animal model.

骨肉瘤(OS)是青少年易发生的恶性肿瘤之一，其发生和发展的特点是肿瘤恶性增殖和转移，目前缺乏有效的防治措施。抑瘤汤在临床中治疗OS患者，展现良好的效果，但是其作用机理还不清楚。申请者在前期工作中发现IFITM1在瘤体中高表达，经IFITM1 RNAi慢病毒转染U2OS后细胞增殖、迁移降低，凋亡增多。经查阅资料后证实，IFITM1在多种肿瘤的发生、发展中发挥重要的作用，其表达可能是通过Wnt/β-catenin信号通路调控。而Wnt/β-catenin信号通路的激活恰恰和肿瘤的增殖密切相关。故我们推测Wnt/β-catenin通路的激活对于OS的恶性增殖至关重要。本项目拟在此基础上，从大样本回顾性分析中总结IFITM1对于OS的发生、外科分级、预后等的相关性。同时，在细胞和动物模型中进一步探讨IFITM1/Wnt/β-catenin调控OS恶性增殖及抑瘤汤抗OS作用的分子机制。

骨肉瘤(OS)是青少年易发生的恶性肿瘤之一，其发生和发展的特点是恶性增殖和转移，目前缺乏有效的防治措施。抑瘤汤在临床中治疗OS患者，展现良好的效果，但是其作用机理还不清楚。本项目收集本院近5年内骨肉瘤患者样本数据，回顾性分析、总结IFITM1对于OS的发生、外科分级、预后等的相关性。在骨肉瘤细胞株中过表达和沉默IFITMl 基因，观察细胞功能变化。在细胞实验基础上，应用裸鼠成瘤动物模型进行验证，观察IFITMl 对于骨肉瘤恶性增殖的影响，阐明抑瘤汤在抗骨肉瘤治疗中所发挥的作用机制。结果如下：1. Kaplan-Meier生存分析提示，IFITMl蛋白表达与患者RFS显著相关（P＜0.001），IFITMl蛋白阴性者与阳性者相比RFS更优。IFITMl蛋白表达与患者的PFS显著相关（P＜0.001），IFITMl蛋白阴性者与阳性者相比PFS更优。提示 IFITMl阳性可能影响OS患者的预后。2. IFITMl 基因过表达MG63细胞功能检测等，结果提示：IFITMl 基因过表达MG63细胞增殖、迁移、粘附等能力增强。3.流式细胞仪、TUNEL法等方法观测抑瘤汤含药血清对MG63细胞凋亡的影响，结果提示：抑瘤汤含药血清具有增加MG63细胞凋亡的作用。4.多种生信数据库及软件分析OS发生、发展的信号通路网络及qRT-PCR验证。结果提示：(1)ELANE、MPO、P4HA1和ITGAV相对表达量在骨肉瘤组织与正常骨组织中具有明显差异性（P<0.05)，ELANE、MPO、P4HA1和ITGAV可作为骨肉瘤预后的潜在生物标志物。(2)微阵列分析OS转移患者SYK和TYROBP基因的相对表达量与qRT-PCR验证结果一致，且有统计学意义，两者可作为骨肉瘤转移预后的潜在生物标志物。(3)三个铜死亡相关lncRNA（AC124798.1、AC090152.1、AC090559.1）可能有助于对骨肉瘤患者预后进行指导，为临床决策提供一定理论依据。5.抑瘤汤通过下调IFITMl 基因表达，从而抑制Wnt/β-catenin 通路的异常活化，达到抑制OS的作用。以上实验结果为抑瘤汤治疗骨肉瘤的临床应用提供理论依据。