慢性特发性血小板减少性紫癜中寡克隆增生的T细胞的生物学特性及功能研究

慢性特发性血小板减少性紫癜（ITP）是一种自身免疫性疾病，T细胞在其发病中起着重要作用。既往研究证实ITP患者发病时T细胞寡克隆性增生，但对于寡克隆增生T细胞的生物学特性知之甚少。本研究利用T细胞受体β链可变区的不同，确定ITP患者体内寡克隆增生的T细胞，然后用流式细胞术分选出寡克隆增生的CD4+CD28+Vβ细胞及CD8+CD28+Vβ细胞，研究这些细胞的生物学特性、功能及其在发病中的作用；同时研究大剂量地塞米松治疗ITP对患者体内T细胞克隆的影响。以期在此基础上发展抑制寡克隆增生T细胞，或是纠正其分泌的关键细胞因子的定向免疫干预治疗方案，这将不仅可为治疗慢性ITP提供一个崭新的途径，同时也为其它自身免疫性疾病的治疗提供新的思路。

本研究计划要点:分析ITP患者T细胞在发病及缓解时的变化，研究T细胞的寡克隆增殖的意义; 分离出CD4+及CD8+细胞中的T细胞特点及功能，分析其中细胞组成及分泌的主要细胞因子，为开拓新的治疗方法提供理论依据; 研究大剂量地塞米松治疗对慢性ITP患者的T细胞以及B细胞的影响，为进一步优化现有治疗方案提供理论依据。.课题进行按计划进行：2010.01～2011.10：纳入病例，流式细胞检测寡克隆T细胞，随访患者，比较治疗前后的变化。2010.11～2011.10：用流式细胞分离出增生的寡克隆，观察它们的功能。2011.11～2012.06：用流式分离细胞，测定相应细胞因子mRNA及蛋白表达。2012.07～2012.12：资料总结，撰写论文等。.主要进展与成果：检测激素治疗前后ITP患者T细胞因子的变化，分离ITP患者外周血 T细胞，Real-time PCR测定IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17、IFN-γ，TGF-β、T-bet、GATA-3、Foxp3、RORγt mRNA表达。结果表明治疗前ITP患者T-bet、IFN-γ、IL-2表达较正常对照明显升高（p<0.01），治疗后T-bet、IFN-γ、IL-2表达较治疗前降低（p<0.05）；治疗前患者TGF-β的表达较之于正常对照无明显差别，治疗后老年患者与年轻患者中呈现不同的变化模式，年龄<60yrs患者治疗后TGF-β表达水平较治疗前降低（p<0.05），而年龄≥60yrs患者TGF-β较治疗前中升高。研究Treg细胞Th17在ITP疾病中的改变及其变化机制，发现Treg/Th17表达失衡，并与预后相关；探讨ITP患者外周血B-1a细胞数量及其分泌白介素10(interleukin-10, IL-10)能力的改变，以及其在不同疾病状态下的变化。研究作为调节功能的B细胞在ITP患者治疗前后的变化特点。ITP患者外周血CD5+ B细胞比例升高，细胞内IL-10积聚，但CD5+ B细胞分泌IL-10到胞外的能力下降；疾病缓解后，CD5+ B细胞的数量及分泌IL-10的能力得到恢复。已发表SCI论文2篇(影响因子分别为3.077和4.092)，发表国内核心期刊论文6篇。资助2名研究生毕业（硕士及博士研究生各1名）。