寡克隆肝癌浸润淋巴细胞的抗瘤活性及机制研究

肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）与肿瘤细胞密切接触而被认为是宿主对肿瘤识别的直接而特异的表现，是过继免疫治疗主要的效应细胞，具有特异高效的抗肿瘤作用。然而，新鲜提取的TIL抗瘤活性低下，临床疗效并不理想。研究表明在诱发阶段调节性T细胞（Treg）诱导TIL发生免疫偏倚，有的则因Treg数量显著增多使TIL几无功能，使TIL的抗瘤免疫陷入困境。而Treg尤其是肿瘤微环境中数目增多是肿瘤免疫治疗亟待解决的问题。因此，如何获得大量具有高抗瘤活性的TIL 是过继免疫治疗的关键。虽然目前制备扩增TIL的方法能得到大量细胞，但仍存在缺陷，如不能选择性扩增抗瘤活性强的TIL群体。针对此问题，本项目旨在建立一种TIL的寡克隆培养方法从肝癌组织中选择性扩增抗瘤活性强的TIL细胞群。通过TIL的抗瘤活性与Treg之间的关系进行研究，为寡克隆肝癌浸润淋巴细胞的培养扩增用于过继免疫治疗提供理论依据及实验基础。

肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）是一群存在于肿瘤间质内的异质性淋巴细胞群，具有特异、高效的抗肿瘤作用。虽然现有的TIL制备方法能得到大量细胞，但经培养扩增的TIL抗瘤活性低下，临床疗效并不理想。研究表明在诱发阶段调节性T细胞（Treg）诱导TIL发生免疫偏倚，有的则因Treg数量显著增多使TIL几无功能，使TIL的抗瘤免疫陷入困境。而Treg尤其是肿瘤微环境中数目增多是肿瘤免疫治疗亟待解决的问题。因此，如何获得大量具有高抗瘤活性的TIL 是过继免疫治疗的关键。本项目旨在建立一种寡克隆肝癌TIL培养方法，从而得到大量高抗瘤活性的TIL细胞群用于肝癌TIL的过继免疫治疗。首先通过免疫组化的方法检测了肝癌组织内Treg 的分布及密度。然后采用流式细胞仪等对所分离培养的TIL细胞进行检测、鉴定。实验数据显示，肿瘤浸润淋巴细胞的抗瘤活性与体外培养时间相关；寡克隆法比常规的肿瘤浸润淋巴细胞分离方法在分离细胞纯度、淋巴细胞比例和细胞活性方面有明显的优势。进一步的H22肝癌荷瘤小鼠模型的体内实验研究发现，寡克隆TIL培养法能获得更高纯度的TIL，不仅在体外对小鼠H22肝癌细胞有更高的杀伤活性，在体内对小鼠H22肝癌移植瘤的生长也有更强的抑制作用。其机制可能与抑制Treg细胞扩增，增加细胞因子IFN-γ分泌，降低细胞因子TGF-β、IL-10、FoxP3和IL-17表达有关。从肝癌组织中选择性扩增抗瘤活性强的TIL细胞群，除去机体Treg细胞提高肿瘤疫苗的抗瘤效应，为寡克隆肝癌浸润淋巴细胞的培养扩增用于肝癌过继免疫治疗提供理论依据及实验基础。