多模式成像技术对针灸肝脏血管调节作用的显示及其机理研究

Based on the our group earlier research of acupuncture vasoactive effect in the stomach, (1) Using the laser Doppler and laser speckle blood perfusion imaging technique, to display liver blood perfusion images, in order to analyse difference of heath and alcoholic hepatitis, and the improved range, degree or amount of liver blood perfusion before and after electric acupuncturing(EA) Taichong(LR3) and Zusanli(ST 36) point. (2) Using the radioimmunoassay(RIA), enzyme immunoassay(ELISA) and MTT methods, to test the changes of blood vessel regulation substance in the liver, such as nitric oxide(NO), endothelin1(ET-1), norepinephrine(NE), thromboxane A2(TXA2), prostaglandin I2(PG I2), before and after EA, so that to research the regulatory mechanisms of acupuncture on blood vessel. (3) Using the optical in vivo imaging technique, to test and display the distribution, gather and metabolism of indocyanine green(ICG), CyDye mono-reactive NHS Esters 7(CY 7), adriamycin(DOX) in the liver or body, to find out the changes of circulation and the metabolic activity under EA..These are the research keys that the state of liver blood perfusion in alcoholic hepatitis before and after EA, the effects mechanisms of acupuncture on liver blood vessel, and to explore the application value of multi-pattern imaging technology in the field.

在本课题组医学成像技术对针灸胃脏血管效应研究基础上，（1）应用激光多谱勒和激光散斑血流成像技术，显示肝脏血液循环直观图像，分析健康、酒精肝状态和电针太冲，足三里等穴前后肝脏血流灌注的变化、范围和程度；（2）应用放射免疫、酶联免疫及比色等方法对血管调控物：一氧化氮（NO）、血管内皮素1（ET-1）、去甲肾上腺素（NE）、血栓素A2（TXA2）、前列腺素I2（PGI2）等指标在电针前后肝脏内的变化进行观察，研究针灸的血管调控作用机制；（3）应用活体动物体内荧光成像技术，对吲哚青绿染料（ICG)和菁染料虎铂酰亚胺酯（CY 7）、阿霉素（DOX）在肝脏内的特异分布、或它们的聚集及代谢进行显示，了解活体动物肝脏在电针作用下的循环、代谢功能改变。课题以电针后肝脏血流灌注状态、酒精肝损伤与肝脏血流的关系及针灸肝脏血管效应机制为研究重点，探讨针灸的内脏作用原理和多模式成像技术此领域的应用价值。

本课题第一部分是应用先进的激光多谱勒和激光散斑血流成像技术显示肝脏整体和局部血液循环直观图像，观察到正常状态下肝脏表面血流灌注总量较高，波动相对平稳，血流量减少较少；酒精肝状态下血流灌注总量较低，波动相对平稳；电针干预各组血流灌注量与正常对照组、模型组比较后发现，正常对照组血流灌注量最丰富，其后依次是太冲组，足三里组和造模组；针刺各组各时点与正常对照组和模型组相比都有统计学意义。实验结果表明针刺作用可以增加酒精性肝损伤肝表面血流灌注量；针刺增加肝表面血流灌注量的效应具有穴位特异性。.本课题第二部分是电针曲泉穴和足三里穴后对血管活性物质NO、ET-1、TXA2和PGI2以及神经递质NE进行检测，实验结果显示通过电针治疗可使正常动物肝组织内NO含量增高，ET-1含量减少，NE含量降低，说明在正常动物中电针能有效增强肝组织内舒血管物质NO的释放，抑制缩血管物质ET-1和NE的生成；电针“足三里”穴升高肝组织内舒血管物质NO含量的效应明显优于曲泉穴；同时电针能够降低酒精性肝损伤模型动物肝脏内ET、TXA2平均含量，升高PGI2平均含量，有利于酒精性肝损伤模型动物肝脏内ET、TXA2平均含量恢复正常状态。研究结果表明针刺可以有效调节肝脏血管血流相关物质，为针灸治疗酒精肝疾病提供有力实验依据。.本课题第三部分是通过应用活体荧光成像技术，在体内注射肝脏特异性靶向的ICG和非特异性CY7、DOX等荧光染料后，观察这些荧光染料在体内的正常分布状态和电针后重新分布的显像。 .实验结果显示ICG在注射30分钟后肝脏内ICG达到最大荧光强度，此后被肝细胞以一级速率代谢清除，荧光逐渐减弱；而电针不但使得ICG在肝脏内的荧光强度减弱，并使荧光发光在肝脏持续时间减短，说明电针可以加快ICG在肝脏的代谢活动。而CY7、DOX在注射后的24h实验动物体内荧光染料均匀分布，在肝内均无聚集现象。本实验结果提示应用活体荧光成像技术研究电针对ICG的肝脏代谢影响是可行和可靠的方法，而ICG荧光成像技术应用于肝脏代谢的研究为针灸—肝脏效应机制研究奠定了一定基础。