苦参甘草组方对肝脏枯夫氏细胞TNF-α信号传导途径的双相调节作用及其机理研究

肝脏枯夫氏细胞TNF-α介导的信号传导途径，具有促进肝细胞生长和诱导肝细胞凋亡的双重作用。调控肝细胞生长与其NF-κB通路有关，诱导凋亡与JNK通路有关。最近，我们的研究发现，苦参甘草组方能够促进肝细胞生长，同时，抑制肝癌的形成。该作用与肝脏枯夫氏细胞TNF-α介导的信号传导途径密切相关。本课题拟采用GUTs和CYP2E1基因敲除的MB6c小鼠，研究苦参甘草组方保护肝脏、抑制肝癌形成作用的分子机理；采用固相萃取技术和血清药理学的方法，研究苦参与甘草的代谢产物（4-羟基苦参碱，苦参碱-葡萄糖醛酸复合物，甘草甜素-葡萄糖醛酸复合物），对上游靶分子的负反馈调节作用。该研究旨在：阐明苦参甘草组方对肝脏枯夫氏细胞TNF-α信号传导途径的双相调节作用及其分子机理，为扩大苦参甘草组方的临床应用，提供理论依据；为研究中药方剂"相辅相成、相生相克"的作用特点，提供一种新的思路。

研究背景：慢性肝脏疾病在我国是常见病和多发病，仅慢性乙型肝炎病人就有3千多万。全球每年新发病的肝癌病人数量大约56.4万人，我国是30万左右，占全世界肝癌发病率的半数以上。慢性肝病与肝癌的防治，是我国卫生工作者面临的重大任务。近年来，我们课题组研究了苦参、甘草以及苦参甘草组方的药理作用和作用机理。我们发现，苦参甘草组方具有明显的保护肝脏、抑制肝癌形成的作用；但其分子机理不详。该研究的理论假设：苦参甘草组方对肝脏Kupffer细胞TNF-α信号传导途径具有双相调节作用，从而起到保护肝脏，抑制肝癌形成的作用。.主要研究内容：该《项目》的主要研究内容包括：1.采用基因敲除小鼠等方法与技术，研究苦参甘草组方保护肝脏、抑制肝癌形成作用的分子机理；2.采用固相萃取技术和血清药理学的方法，研究苦参与甘草的主要代谢产物对上游靶分子的负反馈调节作用。.重要结果及关键数据：1.在CYP2E1（-/-）基因敲除小鼠，苦参甘草组方对肝脏的保护作用消失，醋氨酚诱发肝脏功能衰竭，其死亡率为100%，阳性对照组为40%，正常对照组死亡率为零，三组间差异两两比较均有显著性（P <0.05）。2.肝脏组织病理学检查表明：基因敲出小鼠肝组织呈灶性坏死，充血、水肿明显；3.血清酶学检查ALT和AST明显升高；4.与野生型小鼠GUTs（+/+）相比，苦参甘草组方抑制二乙基亚硝胺诱导肝癌形成作用，在GUTs基因敲除小鼠（-/-）明显减弱。组织病理学检查显示：其肝脏肿瘤结节呈上皮细胞样癌巢，肝小叶结构破坏，肿瘤组织a-FP染色呈阳性；5与对照组比，4-羟基苦参碱组小鼠肝脏CYP1A1 mRNA表达增加了1.4倍，甘草甜素-葡萄糖醛酸复合物组CYP1A1 mRNA表达增加了1.7倍，而联合用药组小鼠肝脏CYP1A1 mRNA表达增加了4.5倍。蛋白印记分析表明，4-羟基苦参碱组CYP1A1蛋白含量增加了1.3倍，甘草甜素-葡萄糖醛酸复合物组CYP1A1蛋白含量增加了1.6倍,而联合用药组小鼠肝脏CYP1A1蛋白含量增加了3.8倍。已发表学术论文二篇，申请国家发明专利一项。.科学意义：1.苦参甘草组方保护肝脏、抑制肝癌形成作用的分子机理，与CYP2E1和GUTs介导的信号传导通路密切相关；2.为研究中药方剂“相辅相成、相生相克”的作用特点，提供了一种新的思路；3.为苦参甘草组方的临床应用提供了理论基础。