LPLUNC1抑制LPS介导的TLR4/NF -κB、MAPKs 信号传导通路的机制研究

炎症是癌症的第七特征，炎症能促进癌症的发生和发展。然而，其机制尚未阐明。鼻咽癌属于炎症相关性肿瘤，慢性炎症在鼻咽癌的发生发展中有着重要的作用。TLRs/NF-κB信号通路是联系炎症与肿瘤的桥梁。LPLUNC1基因是我室克隆的鼻咽癌表达下调的新基因，生物信息学分析其含有2个BPI结构域，是一种抗炎性分泌蛋白。我们的研究发现鼻咽癌细胞存在CD14、TLR4 与MD2的表达，能与LPS结合活化NF-κB 与MAPKs 信号通路。基因芯片结果初步显示LPLUNC1可影响TLRs/NF-κB 、MAPKs信号通路。因此本项目瞄准"炎癌链"这一热门话题，在此基础上，应用一系列分子生物学方法及已构建好的LPLUNC1基因敲除小鼠进一步研究LPLUNC1对LPS介导TLR4/NF -κB、MAPKs 信号通路的影响，从源头为炎症与肿瘤相互关系的发病机制研究提供新的方向，为鼻咽癌治疗提供分子靶标。

LPLUNC1基因是我室克隆的鼻咽癌表达下调的基因，一种分泌性蛋白，大量存在于鼻咽和呼吸道分泌物、灌洗液和痰液中。它可借助其BPI结构域行使宿主防御功能，具有杀菌抗炎的作用。免疫组化结果表明LPLUNC1 蛋白在正常鼻咽上皮和腺体中高表达，而在大多数鼻咽癌组织中低表达或阴性表达，而且LPLUNC1 蛋白表达下调与鼻咽癌临床进展分期正相关，Kaplan-Meier 生存显示LPLUNC1 蛋白阳性表达的鼻咽癌患者临床预后明显好于阴性表达患者，鼻咽癌组织中LPLUNC1 蛋白表达与IL-6 蛋白表达和TAMs 浸润密度明显负相关。生长曲线绘制、MTT及裸鼠成瘤等实验均显示LPLUNC1基因可明显抑制鼻咽癌细胞生长与增殖；流式细胞和凋亡检测发现LPLUNC1基因可引起鼻咽癌细胞G0/G1期阻滞和诱导凋亡，进一步研究显示，LPLUNC1基因可通过抑制鼻咽癌细胞NF-κB 和Stat3 信号传导通路，下调CDK4、cyclin D1、Bcl-2 基因表达，上调p21、Bax 基因表达。随后我们分别使用Jak2 和NF-κB 特异性抑制剂（AG490、BAY 11-7082）分别阻断HNE2/Vector、HNE2/LPLUNC1 细胞中Stat3 和NF-κB 信号通路，结果发现AG490、BAY 11-7082 均能明显抑制鼻咽癌细胞增殖，而LPLUNC1 基因与各抑制剂之间明显具有协同作用。上述结果表明LPLUNC1基因可抑制NF-κB 和Stat3信号通路的激活，引起G0/G1期阻滞和诱导凋亡，从而抑制鼻咽癌细胞生长。LPLUNC1基因可明显抑制IL-6 对鼻咽癌细胞的促增殖和加速细胞周期演进的作用，LPLUNC1基因还可通过抑制IL-6 介导的NF-κB 和Stat3 信号通路的激活，下调cyclin D1、Bcl-2 基因表达，上调p21、Bax 基因表达。因此，LPLUNC1基因可通过抑制IL-6介导的NF-κB 和Stat3信号通路的激活，抵抗促炎因子IL-6对鼻咽癌细胞增殖的促进作用。另一方面，LPLUNC1 可通过下调MAPKs 信号传导通路而抑制cyclinD1 与CDK4 的表达，并降低E2F 的活性，从而抑制细胞生长。