miR-150促进EPCs旁分泌在深静脉血栓机化再通中的机制研究

This study focuses on treating deep vein thrombosis (DVT) by using endothelial progenitor cells (EPCs). EPCs are able to activate an angiogenic program in quiescent endothelial cells by paracrine cytokines and a horizontal tansfer of microRNA (miRNA) in microvesicles. As a small bio-active molecular, miRNA plays an important role in the regulation of cell function. Our preliminary study have found that miR150 could enhance the function of EPCs in the recanalization of the DVT, however, the detailed mechanism is not clear. Considering our preliminary experiment results, we believe that miR150 could activate the Src kinase by inhibiting SRCIN1, which could enhance the paracrine function of EPCs through the downstream signaling molecules such as Stat3 and Ras/ERK/MARK. We plan to investigate the influence of miR150 on the paracrine cytokines by the EPCs; verify the changement of the target gene SRCIN1 and explore the influence on downstream molecules such as Stat3、Ras/ERK/MARK; then observe the influence on HUVECS by MVs containing miR150 derived from EPCs; finally construct rat model with DVT, exploring the influence of classified the EPCs conditioning medium on the thrombus recanalization. This study aims to provide theoretical support for DVT treatment using EPCs.

本课题为内皮祖细胞(EPCs)治疗深静脉血栓（DVT)的系列研究。EPCs可通过旁分泌细胞因子及包裹miRNA的微泡（MVs）靶向内皮细胞促进血管新生。miRNA作为一种微调节器，在细胞功能调控中扮演重要角色。我们前期研究发现miR150可增强EPCs在DVT再通中的作用，但相关机制未被探讨。结合前期实验结果，我们认为 miR150可能靶向SRCIN1激活Src激酶，通过下游信号分子Stat3、Ras/ERK/MARK通路增强EPCs旁分泌功能。我们将对照研究miR150对EPCs旁分泌细胞因子影响；验证miR150 靶基因SRCIN1，并探讨下游信号分子Stat3、Ras/ERK/MARK通路变化；观察EPCs以MVs为媒介包裹miR150靶向HUVECs；最后构建大鼠血栓模型，将EPCs条件培养基分组后注入体内观察其对血栓再通影响。本课题研究成果，期待为EPCs治疗DVT提供理论支持。

下肢深静脉血栓是一种常见的血管疾病，不仅仅造成了患者的健康和生活质量的损害，而且对于引起了沉重的社会和经济负担。本课题为内皮祖细胞(EPCs)治疗深静脉血栓(DVT)的系列研究。较多研究报道了EPCs在动脉缺血性疾病中的促血管生成作用。然而，关于EPCs移植到深静脉血栓的实验研究尚处于起步阶段。miRNA作为一种微调节器，在细胞功能调控中扮演重要角色。我们前期研究发现miR-150可增强EPCs在DVT再通中的作用，但相关机制未被探讨。结合前期实验结果，我们认为 miR-150可能靶向SRCIN1参与内皮祖细胞的功能调节。在本研究中，我们对比了血栓病人和正常成人成人中内皮祖细胞中miR-150的表达水平，并改变内皮祖细胞中miR-150的表达含量验证miR-150表达水平改变后对内皮祖细胞成血管和增殖能力的影响，此外我们通过生物信息学方法验证了miR-150的靶基因SRCIN1并验证miR-150是通过调控SRCIN1来改变内皮祖细胞的功能。最后我们通过构建大鼠血栓模型，将EPCs条件培养基分组后注入体内观察其对血栓再通影响。研究结果显示，与正常成人相比，血栓病人的内皮祖细胞中miR-150表达水平降低。体外实验发现miR-150表达水平升高可以促进内皮祖细胞的成血管以及增值能力。生物信息学以及双荧光素酶实验验证了SRCIN1为miR-150的靶基因，并且miR-150对于内皮祖细胞的调控是通过改变SRCIN1的表达来实现的。体内实验则进一步证实上调miR-150表达水平的内皮祖细胞有助于血栓的溶解。本课题研究成果丰富了miRNA参与EPCs功能调控的理论基础，证明了EPCs对下肢深静脉血栓病人的潜在治疗作用，为EPCs治疗DVT提供理论和实验支持。