DAL-1在肺癌转移早期事件-EMT中作用的研究

前期通过人肺癌组织标本、胸水分离肺癌细胞和体外实验明确了DAL-1表达与肺癌侵袭转移密切相关；DAL-1表达与EMT发生的关键因子E-cadherin和Snail表达相关；抑制DAL-1表达，E-cadherin表达降低，而Snail表达升高，提示DAL-1可能参与了肺癌转移早期事件EMT的调节。为进一步验证DAL-1与EMT的关系及阐明其调节机制，本研究拟以正反向干预DAL-1表达（转染DAL-1cDNA及其RNAi）的两组肺癌细胞为模型，体外观察DAL-1对肺癌细胞上皮和间质细胞标志蛋白表达的影响、对肺癌细胞生物学行为的影响，验证DAL-1与EMT的关系；应用RT-PCR、双荧光素酶报告基因分析、GST-pull down、蛋白免疫共沉淀等方法，研究DAL-1在转录水平和翻译后水平与E-cadherin、Snail的相互作用关系及对EMT发生的影响，探讨DAL-1对EMT的调节机制。

本研究通过人肺癌组织标本、胸水分离肺癌细胞和体外实验明确了DAL-1表达与肺癌侵袭转移密切相关；通过体外实验正、反向干预肺癌细胞DAL-1的表达，可明显改变肺癌细胞的迁移率、侵袭能力；应用蛋白质组学技术对比检测和分析了转染RNAi前后肺癌细胞的差异表达蛋白，发现两组间差异在6倍以上的蛋白质10个，其中6个是与细胞侵袭和迁移功能有关的蛋白质。由此提示DAL-1基因参与肿瘤转移过程的调控。进一步对调控转移机制的研究：通过人体材料证明了DAL-1表达与EMT发生的关键因子E-cadherin和Snail表达相关，当DAL-1表达下调时，E-cadherin表达降低，而Snail表达升高，提示DAL-1可能参与了肺癌转移早期事件EMT的调节；以正反向干预DAL-1表达（转染DAL-1cDNA及其RNAi）的两组肺癌细胞为模型，体外观察DAL-1对肺癌细胞上皮和间质细胞标志蛋白表达的影响以及肺癌细胞生物学行为的影响，证明了DAL-1与EMT相关；应用RT-PCR、双荧光素酶报告基因分析、蛋白免疫共沉淀等方法，研究DAL-1在转录水平和翻译后水平与E-cadherin、Snail的相互作用关系及对EMT发生的影响，明确了DAL-1能增强EMT过程中的关键因子E-cadherin的启动子活性，从而上调E-cadherin的表达水平，并调控肺癌EMT的过程。转染DAL-1后，经免疫共沉淀—质谱分析，获得含E-cadherin在内的DAL-1相互作用蛋白6个，下一步将深入探讨DAL-1与另5种结合蛋白的相互作用机制。该研究部分阐明了DAL-1的功能及其在肺癌转移中的作用。