人组织激肽释放酶对卒中的脑保护作用及其机制

在中国，脑卒中是导致死亡及残疾的主要疾病之一。体外研究和动物实验均发现人组织激肽释放酶（TK）具有抗血管损伤和预防脑卒中的作用。我们前期的临床研究发现血浆TK含量与脑卒中的发生及其复发呈负相关关系，而与冠心病的发生却呈正相关关系。因此，TK可能对卒中患者具有特异性的脑保护作用。我们拟于在前期的研究基础上，把抗原与抗体相结合的特性及TK能催化其底物BAEE发生化学反应的特性相结合，建立一种新的血浆TK活性检测方法从而解决血浆中蛋白成分复杂不利于TK活性检测的难题；然后通过评估血浆TK含量，活性及TK基因多态性与脑卒中及其复发的遗传易感性之间的关系来证实TK与脑卒中及其复发的因果关系；再通过动物实验及体外研究（脑血管内皮细胞；脑血管平滑肌细胞；神经胶质细胞）进一步证实TK对卒中的脑保护作用并阐明其机制，从而为TK应用于脑卒中的临床治疗及高危人群的筛选提供了理论依据。

体外研究和动物实验均发现人组织激肽释放酶（TK）具有防护脑卒中的作用。我们前期研究发现，血浆TK含量与脑卒中的发生及复发呈负相关关系。因此，TK可能对卒中患者具有独立而强大的保护作用。. 我们在此项目中完成了以下8项内容：1）我们利用体液中的TK能与抗体相结合的特性以及能与其底物BAEE发生反应的性质建立了能检测体液中TK活性的试剂盒。2）利用上述试剂盒检测了脑卒中患者及其正常对照人群中TK的活性，结果发现TK活性比其含量用于评估其与脑卒中复发的关系更为有效。3）我们发现冠心病患者血浆TK的含量明显高于对照组，却与冠心病的严重程度呈负相关关系。这进一步证实了TK对脑卒中患者脑保护作用的特异性。4）我们对社区人群进行TK检测并评估其脑卒中及其危险因素的关系，其中60例发生过脑卒中，989例发生过高血压。在考虑了传统危险因素后，脑卒中的发生与TK呈负相关关系，在这个回顾性资料中的研究进一步证实了TK对卒中患者的因果关系。5）我们对高血压患者及其服用降压药物的研究发现高血压患者服用不同的降压药对TK含量的影响没有统计学意义。6）我们检测了KLK1的基因多态性并发现SNP(rs5516)多态性与缺血性脑卒中有关而与出血性脑卒中无明显相关。7）我们通过大规模培养已有的单克隆抗体杂交瘤细胞株（HTK）来生产大量的TK单克隆抗体并纯化，然后将其吸附在层析柱上，利用抗原-抗体结合及解离的化学性质从人的尿液中提炼出TK，从而建立出能收获TK 的装置。8）我们利用这个装置收获TK蛋白，通过动物实验及体外实验一方面证实TK能使小鼠神经功能缺失明显减轻,梗死体积明显缩小以及神经细胞的形态及存活率明显改善另一方面发现TK通过抑制星形胶质细胞内NF-κB激活而发挥脑保护的作用。 . 整体上项目按计划完成的同时还完成了一部分额外的内容。总之，我们这项研究一方面通过进一步的临床研究及基础研究证实了TK对卒中的脑保护作用及其机制，另一方面，我们进行了两项技术创新，其中体液中TK活性检测的试剂盒对脑卒中患者的评估可能具有一定的临床应用价值，而TK收获装置可用于简单的收获TK蛋白，可能具有一定的使用价值。