基于DR5和DNA末端保护的原位化与微量化IAA测定方法学研究

传统植物激素测定方法难以满足前沿研究领域对微量样品中超微量植物激素进行准确定量和原位检测的迫切要求。对调控作用广、含量极低且易于流动、对光温等环境条件特别敏感的IAA尤其如此。因此，研究IAA检测新技术已成为当务之急。.项目拟结合生物学科和化学学科在免疫分析、分子生物学和电化学与荧光检测等方面的新技术，分别基于DR5启动子和DNA末端保护建立IAA的高灵敏测定新方法。首先，以转DR5::GFP拟南芥根尖原生质体为材料，经IAA诱导 GFP表达后，分别从GFP荧光强度、分子数目和mRNA表达水平等建立其与IAA的准确数量关系，从而实现细胞水平的IAA定量原位测定。其次，基于末端保护分析平台将标记核酸探针的IAA与样品IAA竞争抗体蛋白，通过核酸外切酶酶切后利用电化学或荧光定量方法对末端保护后IAA标记探针进行检测，以实现IAA的高灵敏检测。同时，优化和规范测定条件并应用于植物激素检测实践。

传统植物激素测定方法难以满足前沿研究领域对微量样品中超微量植物激素进行准确定量和原位检测的迫切要求。对调控作用广、含量极低且易于流动、对光温等环境条件特别敏感的IAA尤其如此。因此，研究IAA检测新技术已成为当务之急。本项目结合生物学科和化学学科在免疫分析、分子生物学和电化学与荧光检测等方面的新技术，开展基于DR5启动子和DNA末端保护的IAA高灵敏测定新方法研究。. 通过多学科交叉攻关研究，以转DR5::GFP拟南芥为材料，建立了成熟的拟南芥根尖原生质体分离方法及GFP荧光强度测定及荧光定量法检测GFP表达的方法，并测定了原生质体的生长素含量，建立了基本建立了生长素与GFP间的梯度关系。基于末端保护分析平台将标记核酸探针的IAA与样品IAA竞争抗体蛋白，通过核酸外切酶或内切酶酶切后利用电化学或荧光定量方法对末端保护后IAA标记探针进行检测，实现了IAA的高灵敏检测。此外还应用新购置的LC-MS/MS，实现了对5个拟南芥根尖或1粒拟南芥种子中IAA的测定；积极开展科研合作，先后为30余个课题组提供了测定服务，样品数超过2000个；项目共发表论文33篇，其中SCI研究论文33篇(标注项目号的SCI论文影响因子总计超过80)；出版专著1部；申请国家发明专利1项，授权3项；项目主持人应邀担任IPGSA 国际会议组委会成员和分论坛主席；应邀在国际会议（IPGSA）和全国性会议上分别报告1次和3次；培养研究生和博士后19人。