基于Notch信号通路调控小胶质细胞极化的栝楼桂枝颗粒抗缺血性脑卒中的作用机制研究

Activation and polarization of microglial cells based on Notch signal pathway play an important role in cerebral ischemic stroke. The famous Gualou Guizhi prescription is good for the recovery of stroke happening in clinical practice. Previous studies have shown that Gualou Guizhi prescription could inhibit neuronal apoptosis and glia proliferation. In addition, it can induce BV2 to anti-inflammatory M2 polarization state. To carify this mechanism of Gualouguizhi Granule, we intend to develop ischemia reperfusion injury (MCAO) model and LPS and Jagged 1/Fc induced microglia activation model, investigate the effect of Gualouguizhi Granule on regulating the polarization of microglia based on Notch signaling pathway by in vivo and in vitro. Then use inhibitor and siRNA to validate the target influenced by Gualouguizhi Granule. Moreover, intend to illustrate the mechanism of Gualouguizhi Granule, the neuroprotective effect on neurons cultured with microglia culture medium was analysed. The study will establish a theoretic and experimental foundations for using Gualouguizhi Granule against cerebral ischemic stroke.

Notch信号通路调控的小胶质细胞活化及其极化表型在介导缺血性脑卒中脑组织损伤中发挥重要作用。经方栝楼桂枝汤在临床上用于治疗脑卒中疗效确切。前期研究表明该方可显著抑制神经元凋亡、抑制小鼠小胶质细胞（BV2）的增殖并将其诱导为抗炎症的极化表型。本项目拟建立脑缺血再灌注损伤（MCAO）大鼠模型及脂多糖（LPS）、Jagged1/Fc嵌合蛋白诱导BV2活化模型，分别从动物和细胞水平观察栝楼桂枝颗粒对体内外小胶质细胞活化及极化表型以及对Notch信号通路上关键信号分子表达的影响；进一步通过方药干预小胶质细胞与原代神经元共培养，探讨该方对神经元保护作用的靶点及可能的调控机制，并采用抑制剂及siRNA技术进行反向验证，为栝楼桂枝颗粒临床用于抗缺血性脑卒中治疗奠定理论和实验基础。

Notch信号通路调控的小胶质细胞活化及其极化表型在介导缺血性脑卒中脑组织损伤中发挥重要作用。经方栝楼桂枝汤在临床上用于治疗脑卒中疗效确切。前期研究表明该方可显著抑制神经元凋亡、抑制小鼠小胶质细胞（BV2）的增殖并将其诱导为抗炎症的极化表型。本项目在此基础上，建立脑缺血再灌注损伤大鼠模型及LPS诱导BV2活化模型，观察栝楼桂枝颗粒对体内外小胶质细胞活化、细胞表型以及对Notch信号通路上关键信号分子表达的影响；进一步通过栝楼桂枝颗粒干预小胶质细胞与原代神经元共培养，探讨栝楼桂枝颗粒对神经元保护作用的靶点及可能的调控机制，并采用抑制剂及siRNA技术进行反向验证。研究发现栝楼桂枝颗粒能够抑制小胶质细胞活化，促进活化的小胶质由M1型向M2型转化，抑制神经元凋亡，发挥神经保护作用。同时研究结果显示栝楼桂枝颗粒能够下调Notch信号通路上Notch1、Delta1、NICD、RBPSUH、HES1等mRNA、蛋白的表达，给予抑制剂及沉默Notch，栝楼桂枝颗粒调控作用被消除。结果表明栝楼桂枝颗粒可通过抑制 Notch信号通路，抑制LPS诱导的小胶质细胞激活，减少炎症因子的分泌，促进小胶质细胞由M1型向M2型转化，发挥M2型细胞的神经保护功能，初步阐明了其抗缺血性脑卒中的作用机制。本项目在中医“整体观念”理论指导下采用现代生命科学的技术手段揭示了复方中药多途径、多靶点的特点。尽管研究仍有待进一步深入，但已获得的研究结果将为栝楼桂枝颗粒在临床上更广泛和安全地应用提供科学依据。