非小细胞肺癌EML4-ALK融合基因的检测及其与TKIs疗效相关基因和预后关系的研究

以TKIs药物为代表的分子靶向治疗是近年来非小细胞肺癌(NSCLC)新的治疗手段，但疾病控制仍不太理想，而且耐药问题尚难克服，因此必须找寻新的靶标去突破治疗瓶颈。EML4-ALK是近年来在肺癌中新证实的融合癌基因，但目前有关中国人的数据尚不多，由于基因突变与药物疗效的关系已成为药物基因遗传学的重要研究内容，因此本研究通过样本预设的方法，采用FISH检测EML4-ALK融合基因在中国人NSCLC中的发生率，对EML4-ALK(+)采用RT-PCR进行亚型鉴定，绘制融合基因谱，同时对TKIs疗效关健基因EGFR外显子18-21和K-ras外显子1-2 PCR扩增后直接测序，分析融合基因与其突变相关性，回顾性分析与TKIs药物敏感性的关系以及患者的预后和生存进行探讨,对实现以基因分型为基础的个体化治疗、丰富中国人肺癌分子缺陷目录数据库和为将来分子靶向药物的开发和药物治疗提供理论依据和重要的参考。

（1）完成了基于EGFR突变临床特征筛选的102例非小细胞肺癌患者EML4-ALK融合基因、EGFR基因和Ｋ-ras基因的联合检测，并对它们的临床特征进行比较分析。该成果发表于杂志“Gene, Chromosomes&Cancer”上（IF=3.99）。.（2）从102例中检测出的8例EML4-ALK阳性肿瘤标本采用免疫组化的方法EML4-ALK融合蛋白、EGFR、PTEN、EGR-1、EMT和HGF进行联合检测，未能发现上述蛋白在V1和V2变体中的差异，且由于例数太少，文章未能发表。.（3）原计划拟通过优势人群聚集（女性、不吸烟、腺癌三个因素满足其一即可入组）的方式以期获得更高的阳性检出率，但检测结果提示阳性率仍非常低，考虑到短时间难以收集具有统计学意义的例数，加上针对EML4-ALK融合基因阳性的药物Croztinib当时在国内正在进行III期临床研究，2013年7月才正式上市，因此在EML4-ALK阳性病人中验证TKIs疗效及预后关系的研究（本课题第二部分）发现已不具有可行性，我们结合本课题的实际情况，将第二部分做了一些改动，即改为细胞学层面的研究。这在中期汇报中已作过说明。.（4）常规培养人肺癌细胞株H2228(EML4-ALK融合阳性细胞株V3亚型)。证实crizotinib对H2228细胞有抑制生长的作用，且抑制作用随药物浓度增加而增加。IC50值为：334.59nM/L。而TAE684对H2228细胞没有有抑制生长的作用。.（5）采用流式细胞仪检测TKIs作用下H2228细胞株生长特征及凋亡变化，经克唑替尼处理的H2228细胞早期提示细胞出现凋亡，细胞生长明显受到抑制，随着克唑替尼剂量的增加和作用时间的延长，同时还发现Crizotinib能够使H2228细胞阻滞在G1期。.（6）对mTOR信号通路在克唑替尼诱导H2228凋亡作用机制关系进行了相关研究，采用WB方法检测药物对H2228细胞中的PI3K/AKT/mTOR信号通路中的关键蛋白表达水平的影响。目前文章数据已总结完成，文章待发表。 .（7）此外，我们目前还正在检测BIM、Hif信号通路在克唑替尼诱导H2228凋亡过程中的作用机制。. 该课题已培养毕业硕士研究生2名，在读研究生1名，已发表SCI文章一篇，后续估计仍可发表SCI文章1-2篇。