芫花中作用于XIAP通路,介导RhoGDI因子调控肿瘤细胞转移的物质基础及作用机制研究

Daphne genkwa Sieb.et Zucc., is a member of the family Thymelaeaceae (daphne). It is used as a folk medicine for laxative in China. The main chemical constituents of Daphne genkwa were demonstrated to be abundant in daphnane-type diterpenes and flavones.The principle active components daphne-type diterpenoids which showed potent anticancer activities deserved special emphasis, but the mechanism of anticancer is not entirely clear. Antimetastasis may be a mechanism involved in the anticancer activity of diterpenes, XIAP plays an important role in regulating tumor cell invasion and metastasis,and may be a new target of cancer gene therapy.We prefer to investigate on the chemical constituents of Daphne genkwa first by the methods of phytochemistry,analytical chemistry, and pharmacology, then we study the active composition on the anticancer effect and its mechanism, in order to clarify the active ingredient by XIAP mediates cancer cell motility.

中药芫花为瑞香科植物芫花 ( Daphne genkwa Sieb. et Zucc. ) 的干燥花蕾，为传统的泻下逐水药。芫花的主要成分为二萜及黄酮类化合物。其中的瑞香烷型二萜原酸酯类化合物具有显著的抗肿瘤活性，已经成为一个研究热点。目前关于其抗肿瘤作用机制尚不完全清楚，抗癌细胞转移是二萜类化合物可能的一个抗癌机制，而XIAP通路在调节肿瘤细胞的侵袭和转移方面起到了重要的作用，成为肿瘤基因治疗的新靶点。本课题以芫花为研究对象，采用现代中药化学、分析化学、药理学等方法，在充分研究芫花化学成分的基础上，对其活性成分的抗肿瘤作用机制进行深入研究，以期阐明其作用于XIAP通路，调控肿瘤细胞转移的作用机制和特点。

“芫花中作用于 XIAP 通路,介导RhoGDI 因子调控肿瘤细胞转移的物质基础及作用机制研究”项目，首先在对芫花中抗肿瘤作用物质基础进行深入研究的基础上，从芫花花蕾中累计分离鉴定了40个化合物，并对抗肿瘤活性物质“瑞香烷型二萜”进行了10种肿瘤细胞抑制作用筛选，寻找潜在XIAP通路机制的目标化合物。同时详细探讨了“瑞香烷型二萜”类化合物的抗肿瘤活性构效关系。.选择抗肿瘤活性好，量大的YHL-14(芫花酯甲)进行了深入的抗肿瘤作用机制研究。项目在研期间共发表SCI论文1篇，接收在线 SCI论文1篇，累计影响因子6.989。正在审修SCI论文1篇。接收核心期刊论文1篇，发表国内会议论文1篇，授权专利1项，博士毕业论文1篇，完成了预期目标。.　　　实验结果表明YHL-14是通过活化p38,提高sp1的转录活性以及蛋白的稳定性，进而增加P21 mRNA的转录，最终诱导p21蛋白表达增加，发生细胞G2/M期生长抑制作用。western-blot结果显示，T24T细胞在YHL-14暴露12小时后，XIAP蛋白表达开始逐渐降低，24小时后其表达水平明显降低。因此推断，YHL-14抑制肿瘤的作用主要是前期（12小时前）通过抑制其细胞生长周期，后期（24小时后）通过降低XIAP蛋白表达，诱导发生凋亡。综合实验结果说明YHL-14 是通过下调转录因子E2F1的蛋白水平，从而下调XIAP蛋白达到抑制肿瘤细胞生长的作用。.　　　本项目对中药芫花中抗肿瘤活性成分瑞香烷型二萜类化合物诱导肿瘤细胞死亡机制进行深入的研究，及XIAP通路在活性成分的侵袭迁移抑制作用中的角色及作用，在分子水平上寻找新的治疗靶点，旨在从天然产物中筛选抗肿瘤先导化合物，具有重要的研究价值和社会意义。