单克隆抗体用于靶向型腺病毒载体改造

课题计划制备双靶向性腺病毒载体，并研究其在肿瘤治疗中的应用。.病毒载体特别是腺病毒载体是目前基因治疗最为常用的载体。课题针对载体缺乏组织选择性这一事实，计划制备双靶向性腺病毒载体并研究其在肿瘤治疗中的应用。腺病毒载体的靶向性从两个方面进行设计。第一、将抗血管内皮特异αv整合素的单抗以融合蛋白（TEF-scFv）的形式植入病毒颗粒表面，取代病毒感染决定因子纤维蛋白；第二、病毒在内皮细胞中的特异复制将通过血管内皮细胞特异性启动子TIE2控制的E1a基因表达来实现。由于αv整合素在肿瘤新生血管内皮细胞表达高，改进型病毒将具有单抗和特异性启动子控制的双靶向性。载体的靶向性将通过细胞生物学及地鼠肿瘤模型验证。由于增殖型腺病毒载体介导的基因/抗癌活性物质可以在靶细胞持续表达，所以只要靶细胞存在，病毒介导的基因就会表达，直至靶细胞全部被杀灭。预期改造后的载体具有识别细胞外受体和细胞内代谢途径的双靶向性。

病毒载体特别是腺病毒载体是目前基因治疗最为常用的载体，但是存在组织选择性低，免疫原性强等缺点。另外，由于腺病毒是人类最常见的病原体之一，体内中和抗体普遍存在，影响腺病毒的应用。本课题在前期工作的基础上，拟通过引入针对细胞表面抗原为靶点的肽段至病毒衣壳，增强腺病毒载体的选择性。由于自然界长期进化的结果，病毒衣壳蛋白的折叠以及组装具有严格的几何要求，因此在非自然地引入肽段的同时，保持病毒的稳定性是一个试验过程，有一定探索性。.在课题执行阶段，我们克隆了靶向于血管内皮特异αv 整合素的单抗抗体，将其以单链抗体的形式（scFv）嵌入到腺病毒颗粒表面，以期取代病毒感染的天然决定因子。另外，我们将细胞特异性启动子TIE2克隆至病毒，以期制备组织特异性腺病毒载体。课题期间，我们成功地制备了这些病毒。在实验过程中，我们遇到了一个极具挑战性的问题：改造后的腺病毒稳定性明显下降。在细胞实验上，这些病毒展示了一定的组织选择性，但是整体递送效果与野生型病毒相比明显偏低。实验发现，这与病毒的稳定性密切相关。在后期试验中，我们把精力集中在表达载体的优化而不是原计划的动物验证。我们希望引入用于肽段连接的短肽等，提高病毒稳定性。.在项目执行期间，我们还制备了一系列用于实验室研究使用的腺病毒，并成功地用于缺血性心梗研究和抗肿瘤研究工作。这些工作发表在学科主要刊物上。引用本课题资助的SCI论文总共4篇，SCI总分数在15分以上。