雷公藤甲素抑制肝癌作用的新分子靶点（oncomirs）研究

雷公藤甲素是中药雷公藤的主要活性成分，具有广泛的转录抑制活性,亦可能抑制癌miRNA(oncomirs)的转录,而后者能够促进肿瘤的发生发展。本课题组前期实验证明甲素对人肝癌细胞有明显的生长抑制效应和促凋亡作用，但其中的分子机制不明。我们将通过miRNA芯片和实时定量 PCR技术筛选出甲素刺激后肝癌细胞内表达明显改变的oncomirs；结合生物信息学技术成果，筛选oncomirs编码基因，运用CHIP、报告基因等方法探索甲素转录调节效应的分子机制，采用基因转染和RNAi技术，观察目标oncomirs不同表达水平对甲素诱导肝癌细胞凋亡作用的影响，以明确甲素对oncomirs的转录调节效应和其诱导肝癌细胞凋亡作用的相关性。本研究交叉多学科技术，从miRNA转录调节的视角出发，探索甲素抗肝癌作用的分子靶点及其机制，具有一定的创新性，为抗肝癌中药有效成分的研究与开发应用提供新的思路和理论依据。

摘要.研究背景：.原发性肝癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，给全社会带来了沉重的疾病负担和巨大经济损失。目前，肝癌仍缺乏有效的治疗手段，因此研发价格低廉的新型有效抗肝癌药物具有重大的现实意义。微小RNA（miRNA）是一种内源性非编码小RNA，对生物体的生长和发育起重要调节作用，其表达异常与包括肝癌在内的多种疾病发生发展密切相关，因此可能成为一个治疗肝癌的重要靶点。雷公藤甲素（以下简称甲素）是提取自中药雷公藤的一种二萜内酯类化合物，具有多种生物学活性。研究表明，甲素具有广泛的转录抑制效应，能够抑制mRNA、tRNA、rRNA等多种RNA的生物合成。我们前期的研究表明，甲素对多种肝癌细胞具有显著的生长抑制和凋亡诱导作用，显示出优良的抗肝癌活性，但相关分子机制不详。由此我们猜测甲素可能通过抑制肝癌细胞内miRNA的转录而产生抗肝癌效应。.研究内容:1、明确甲素对人肝癌细胞的生长抑制效应和诱导凋亡作用；.2、明确甲素对miRNA的转录调节作用及该作用对甲素诱导肝癌细胞凋亡效应的影响，探索其中的分子机制；.3、明确甲素对裸鼠荷瘤模型的体内抑制效应，并验证相关分子机制。研究结果：1、甲素能够显著抑制多种肝癌细胞的增殖，并且该效应呈时间和剂量依赖性。.2、甲素能够在体外显著诱导多种肝癌细胞发生凋亡，且该效应亦呈剂量依赖性。3、甲素能够显著抑制裸鼠肝癌皮下种植瘤的生长，且对裸鼠的肝肾功能无显著影响。.4、甲素能够通过抑制转录因子c-Myc的转录活性，同时下调miR-17-92及miR-106b-25簇内多个成员的表达。.5、甲素通过抑制靶分子ERCC3的表达抑制c-Myc的表达和转录活性。.6、miR-17和miR-93在人肝癌组织内异常高表达，二者的表达水平高低与患者的无复发生存期及总生存期呈负相关。我们收集了30例新鲜人肝癌组织样本及临床资料，利用qRT-PCR技术检测人肝癌组织内c-Myc、miR-17及miR-93的表达情况。.研究结论：综上所述，我们发现甲素在体内外具有显著的抗肝癌效应，且该效应与甲素对肝癌细胞内c-Myc/miRNA簇/靶基因的调节作用有关。.研究意义：我们发现甲素在体内外具有显著的抗肝癌效应，且该效应与甲素对肝癌细胞内c-Myc/miRNA簇/靶基因的调节作用有关。我们的工作有助于进一步完善对甲素抗瘤活性的了解，为肝癌的治疗提供新的靶点，并为将来