核糖核酸酶L：类风湿性关节炎发病的凋亡调控因子及雷公藤甲素治疗的新靶点？

Chronic synovitis,tumor-like hyperplasia, is the main pathological features of rheumatoid arthritis (RA)，insuffient apoptosis is one of the most important pathogenesises of RA.It is found that RNaseL is an important upstream regulatory factor of tumor cells apoptosis ,as well as RA synovium cells have the same proliferating feature like them.Forthemore, we find that RNaseL in RA synovium is at low level expression.In sum, RNaseL maybe a significant role in the pathogenesis of RA.The post reports and our prophase studies make sure that triptolide(TP) has exact anti-RA function which is induced by it's apoptosis promotion.Meanwhile, they share many targets between TP and RNase L.Therefore,we present the hypothesis that RNaseL is a new target of TP apoptosis promotion.In order to prove this hypothesis, we build a model of RNase L knockout mice with CIA and clinical people hip rheumatoid joint specimens and primary culture synovium cells , to find the correlation between RNaseL expression and RA cells apoptosis, and the regulation mechanism of TP to RNaseL expression in apoptosis promotion, from the whole, cell and molecular level respectively.In a word,the aim of our study is to provide experiment support for pathogenesises of RA and the protection mechanism of TP.Also we aim to find the new targets of anti-RA treatment based on apoptosis, and enrich the biological effects of RNase L.

慢性滑膜炎症("肿瘤样"增生）是类风湿关节炎(RA)的主要病理特征，细胞凋亡不足是其重要的发病机制。核糖核酸酶L（RNaseL）是近年发现的肿瘤细胞凋亡调控因子，最近我们发现RNaseL在RA滑膜表达显著降低，提示RNaseL在RA发病中的重要作用；研究证实促细胞凋亡是雷公藤甲素(TP)抗RA的重要机制，且TP调节细胞凋亡的作用点与RNaseL的调控点高度吻合，因此我们提出"RNaseL是TP促凋亡治疗RA的新靶点"的假说。本项目拟以RA和正常人滑膜组织、原代滑膜细胞及RNaseL基因敲除小鼠为研究对象，以RNaseL为切入点，分别从整体、细胞和分子水平验证RNaseL与RA细胞凋亡的关系，以及TP靶向RNaseL的促凋亡作用。本项目首次将RNaseL引入RA研究，结果将有助于阐释RA发病机制及TP抗RA机理，也将为基于细胞凋亡的抗RA治疗提供新靶点，并进一步丰富RNaseL的生物学作用。

类风湿性关节炎（RA）是一种以滑膜炎症为主要病理特征的自身免疫性疾病，巨噬细胞是导致滑膜炎的主要免疫细胞，尤其是M1表型的巨噬细胞的异常活化，导致滑膜细胞的过量增殖和凋亡不足是RA重要的发病机制。核糖核酸酶L( ribonuclease L, RNase L) 是一种在干扰素抗病毒过程中非常重要的核酸内切酶，也是重要的凋亡调控因子。我们前期的预实验发现RNase L在RA滑膜表达显著提高，且可影响巨噬细胞的功能，提示RNase L可通过巨噬细胞在RA中发挥重要作用。研究证实促细胞凋亡是雷公藤甲素(TP)抗RA的重要机制，且TP调节细胞凋亡的作用点与RNase L的调控点高度吻合，因此我们提出“RNase L是TP治疗RA的新靶点”的假说。本研究以巨噬细胞为切入点，采用RNase L敲除小鼠的CIA模型和RNase L在RAW264.7细胞系和MH7A细胞系上的Knock down的细胞模型，并结合临床RA病人标本，从RNase L调控巨噬细胞分化调节入手，应用RT-PCR、流式细胞分选技术、Western blot等技术和方法。结果显示：（1）通过临床患者滑膜标本以及RNase L敲除小鼠实验，明确了RNase L与RA发病及进展正相关，即RNase L可以促进RA的发生和发展；（2）发现了RNase L的主要定位于巨噬细胞，RNase L可以促进巨噬细胞向促炎型M1方向分化，从而促进炎症反应；RNase L通过激活JAK/STAT1通路而促进M1分化；（3）明确RNase L可以促进滑膜成纤维细胞凋亡；（4）RNase L可促进破骨前体细胞向破骨细胞分化；（5）TP可以抑制巨噬细胞向M1分化，进而抑制炎症反应、促进凋亡、抑制破骨细胞分化，进而降低RA的发病率，减轻RA病情；其作用可被RNase L-/-而削弱。本项目首次将RNase L引入RA研究，结果将有助于阐释RA发病机制及TP抗RA机理，并进一步丰富RNase L的生物学作用，以期可以带动雷公藤的研究与开发。