用B细胞表位分析技术研究甲型流感NA抗原变异

研究B细胞表位有助于新型疫苗设计、诊断试剂开发和临床疾病诊断，但B细胞表位预测和筛选比较棘手。本项目通过检测甲型流感NA基因检测，采用Mega4.0软件等分析其基因和抗原变异；采用SWISS-MODEL和Chimera软件分析其螺旋和片层结构，采用Protean7.1 软件分析其蛋白表面柔性结构。根据目的蛋白的螺旋区、片层区和柔性区(亲水性、可及性、抗原指数）的特性，采用聚类、相关和四分位数方法，进行目的蛋白B细胞表位预测和筛选；参考吴氏抗原指数进行评价。选择Wu`AI高分值的表位序列，人工合成该肽段；并制备免疫血清。包被合成的表位肽段，采用特异的单克隆和多克隆抗体检测；根据ELISA检测结果，判断该表位肽段的特异性和敏感性。根据表位鉴定结果，同时辅以血清学抗原分析和氨基酸位点变异结果，评估目的蛋白B细胞表位序列和变异，为制定甲型流感病毒疫苗、试剂和诊断策略提供依据。

研究B 细胞表位有助于新型疫苗设计、诊断试剂开发和临床疾病诊断。本项目通过检测甲型流感NA 基因检测、基于免疫信息学的表位预测与筛选、采用病毒学检测等技术，鉴定与评估甲型流感H1N1pdm和H3N2亚型毒株NA基因的B细胞表位序列和变异，为制定甲型流感控制策略提供依据。. 主要工作与成果包括，⑴完成H1N1pdm流感NA基因的表位预测、鉴定工作，鉴定7个抗原表位及生物学特性，该表位具有多肽疫苗的研究前景，发表SCI期刊论文2篇；⑵完成H1N1pdm流感NA和HA基因的鉴定、测序、变异分析，检测广东毒株序列24株，分析了毒株变异趋势和流行意义，发表中文核心期刊论文1篇，另3篇论文待发表；⑶完成H3N2流感NA基因的表位预测、鉴定工作，鉴定7个抗原表位及变异，分析了所鉴定的表位变异特征，发表SCI期刊论文2篇；⑷完成2007-2011年H3N2流感NA和HA基因的鉴定、测序、变异分析，检测广东毒株序列24株，发表SCI期刊论文1篇、中文核心期刊论文1篇、科技核心期刊论文1篇；发现HA1基因的表位B、D、RBS2个位点变异；⑸同时完成H3N2流感和H1N1pdm流感NA基因的药物敏感性检测工作，发现2007-2011年H3N2流感17株对于奥司他韦和扎那米韦均敏感(离散值1株)，结论见于SCI期刊论文；发现2009-2011年H1N1pdm流感44株对于奥司他韦和扎那米韦均敏感，研究内容囊括在上述系列论文中。. 迄今为止，本课题基金共资助发表论文10篇(其中5篇SCI期刊收录)，另外2篇论文(中文)待发表，2篇论文(英文)在外审中；申报发明专利1项(发明专利申请号201010116631；公开号CN102153621A；实审中)；在研期间，项目负责人(黄平)作为硕士研究生指导教师,已培养一位公共卫生专业硕士研究生(梁丽君，挂靠在中山大学公共卫生学院),协助两位晋升职称；共资助1人次参加国际专业学术交流会(2012年美国旧金山)和5人次参加3次国内专业学术交流会。. 课题组在本项目实施期间，既严格按照原设计执行，也扩展相关的研究范围，为下一个相关研究课题的申请进行铺垫。