犬源贾第虫人畜互传的分子机制

贾第虫病是一种重要的水源性人畜共患疾病。考虑到犬食人粪的特性，本项目将以犬贾第虫作为模型研究贾第虫人畜互传的分子机制。首先采用贾第虫分离技术从全国各地收集犬贾第虫分离株,对其不同基因位点（16S rRNA、bg、gdh、 tpi、ITS1和ITS2）进行PCR扩增与测序,将所测得的各基因序列用DNA star 软件进行排序和分析,并与基因库内标准株各基因的序列进行比较,阐明其种群遗传特征；根据各分离株的多态性（RFLP、SSCP）和微卫星指纹分析，结合新型MLST分型技术，建立贾第虫基因型的分型标准和方法；拟对我国动物源贾第虫进行分子流行病学调查，并利用犬对人源和动物源贾第虫进行交叉传播试验，以便弄清我国境内动物源贾第虫的流行基因型及其传播风险以及在感染和传播过程中的动力学规律，为贾第虫的分子检测和风险评估提供技术支撑，为进一步有效地防范贾第虫对我国水质安全与食品卫生等侵害提供决策依据。

本研究对广州和佛山两地宠物犬与流浪犬进行了采样调查，成功地分离到蓝氏贾第虫。对其分离株进行了16S rRNA，gdh，EF1α, bg和tpi 5种基因的基因型鉴定,首次发现犬源贾第虫特异性基因型（D型）和人畜共患基因型（A1亚型）。首次针对贾第虫的tpi基因，以WB和GS分离株为模板DNA，制备阳性标准质粒，成功地建立了区分蓝氏贾第虫A型和B型的HRM快速基因分型方法；首次针对贾第虫16S rRNA基因设计一对引物，将构建的重组质粒作为阳性标准品，建立了贾第虫DNA的SYBR GreenI real-time PCR检测方法。根据贾第虫EF1α基因设计6条特异引物，建立了犬特异性基因型的可视化LAMP检测方法。运用所建立的PCR检测方法对广州市宠物犬进行了分子流行病学调查，调查结果显示宠物犬贾第虫总感染率为11.00%；基因型鉴定结果显示，人兽共患基因型A型占21.74%，犬特异性基因型D型占78.26%。上述研究为水源性贾第虫的防控提供了重要资料，同时亦为贾第虫的基因分型以及贾第虫病的临床检测和流行病学调查提供了新的技术手段。