miR-625*在肝癌中的意义及功能研究

在预实验中，我们采用含700个microRNA的自制芯片检测了17例肝癌，发现miR-625*在肝癌中的表达明显降低，并用定量PCR证实了芯片的结果；经检索，未发现任何有关此microRNA功能和作用的报道，提示miR-625*可能是一个全新的候选"抑癌基因"。因此，本申请项目在此基础上，采用microRNA芯片继续检测约120例肝癌，以确定miR-625*在肝癌的表达状态，并鉴定出肝癌表达谱，结合临床资料分析以阐明两者在临床中的作用和意义；通过转染miR-625*前体进入肝癌细胞系，观察其克隆形成、成瘤性和侵袭性及转移能力等变化，同时采用基因表达芯片检测miR-625*转入后肝癌细胞mRNA表达谱的变化，经生物信息学分析找出其可能的靶基因和调节的信号通路，并对重要的靶基因予以验证，以阐明miR-625*的作用机理。本项目是在我们研究中新发现的基础上提出来的，具有可行性、新颖性和科学性。

MicroRNA表达的变化涉及到了人类的各种肿瘤而且在肿瘤临床中显示出了的潜在应用前景。在本课题中，将110例肝癌病人随机分成训练组（60例）和检验组（50例），另一组56例病人作为独立组。采用自制芯片检测了肝癌的miRNA表达，在训练组首先建立了一个由30个miRNA组成的标签，其区分肝癌和癌旁肝组织的准确性高达99.7％；在这30个miRNA中，10个表达下调、20个表达上调。这一标签在检验组和独立组的诊断准确率分别达到97％和90％。该标签中，4个miRNA的表达用定量RT-PCR在训练组中进行了验证，结果与芯片数据一致。接着，在训练组中又鉴定出一组由20个miRNA组成的标签，用于评估病人的预后。在这20个miRNA中，6个为风险因子、14个为保护因子。同时，基于这20个miRNA的表达，建立了一个风险指数公式。生存分析表明，具有高风险的病人生存率明显低于低风险的病人。这一标签的作用在检验组和独立组均得到了验证。多因素Cox模型分析表明，20-miRNA标签是肝癌的一个独立预后因子。上述结果已投稿《Clin Cancer Res》并修回。. 在20-miRNA标签中，miR-497的表达水平明显降低。尽管已有报道显示miR-497在某些肿瘤中表达降低，但其在肝癌中的状态尚未见报道。因此，我们对miR-497在肝癌中的表达和作用进行了深入的探讨。用定量RT-PCR方法，我们发现miR-497在131例肝癌中普遍表达下调，而且与肝癌病人的预后差有关。多因素Cox模型分析表明，miR-497是肝癌病人的一个独立预后因子。在体外，上调miR-497表达能强烈地抑制肝癌细胞增殖、克隆形成，并阻滞细胞周期于G1期和提高凋亡；在体内，上调miR-497也能明显地抑制肝癌移植瘤的生长。在机制方面，我们的结果证明miR-497是通过靶向抑制CCNE1基因而阻滞肝癌细胞周期和引起凋亡。在肝癌组织中，miR-497与CCNE1的表达呈现负相关，也间接证实CCNE1是miR-497的靶基因。总之，本课题证明了miR-497通过靶向抑制CCNE1和BCL2发挥肿瘤抑制作用，同时我们的结果也将为肝癌临床提供新的潜在的预后标志物和治疗靶点。此一成果已投稿《Gastroenterology》，正在评阅中。