新型调节性B细胞（B10 cell）调控肾移植免疫耐受作用及相关机制

传统观点认为B细胞主要通过分泌抗体促进移植肾急性排斥，最新研究提示B细胞参与肾移植免疫耐受。在自身免疫性疾病中证实存在负向免疫调节作用的新型调节性B细胞，为调节性B细胞在肾移植免疫耐受中的作用研究提供支持。申请者前期研究发现肾移植接近耐受者外周血单个核细胞中B细胞标志物CD20表达水平显著升高，为进一步验证是否存在调节性B细胞及其作用机制，本课题设计通过肾移植动物模型，于肾移植前后不同时期去除受者B细胞，然后过继输注CD1dhighCD5+新型调节性B细胞（B10 cell）以观察B10 cell对移植肾存活的影响；同时结合体内外实验如B10 cell对CD4T细胞增殖分化影响，Treg细胞和Th细胞偏移，抑制性和效应性细胞因子变化及供者特异性抗体水平等进一步分析B10 cell调控移植免疫耐受相关作用机制。为B10 cell诱导免疫耐受提供直接科学依据，进一步为免疫耐受诱导提供新的方案。

原研究计划为通过小鼠肾移植模型，研究新型调节性B细胞（B10细胞）对肾移植免疫耐受的作用及相关机制。小鼠肾移植为本研究关键实验技术，国内关于小鼠肾移植相关研究报道甚少，国际上仅个别移植中心从事小鼠肾移植及相关研究，关键问题是移植后短期内死亡率高，长期存活率低下。本课题组原有一成员曾赴德国进修专门从事小鼠肾移植，已熟练掌握小鼠肾移植技术，但该成员于2012年赴国外攻读博士。课题组其它成员重新学习小鼠肾移植技术，但移植后7天内死亡率高，长期存活率低下，影响实验进展，未能顺利开展该课题。.故2013年起调整课题内容，研究内容改为B10细胞在阿霉素诱导的肾病中的作用探索，该疾病表现为大量蛋白尿或肾病综合征，是公认的原发性肾小球疾病模型。该研究探索B10细胞在原发性肾病中的作用，有助于进一步揭示原发性肾小球疾病的发病机制，为后续靶向治疗提供依据。.本课题主要完成的内容及取得成果：1）建立了阿霉素肾病模型，阿霉素造模小鼠产生大量蛋白尿，电镜检查显示足细胞足突部分融合；2）首次分析了阿霉素肾病模型小鼠外周血B10细胞表达，阿霉素肾病小鼠和对照组小鼠外周血中B10细胞含量都很低，两组之间没有统计学差异。3）观察了输注B10细胞对阿霉素肾病的疗效，阿霉素肾病造模2周输注B10细胞，观察4周，B10细胞输注未能有效降低阿霉素肾病小鼠蛋白尿，未能改善足细胞足突病变。.现有课题结果显示阿霉素肾病造模2周输注B10细胞未能降低肾病小鼠蛋白尿和改善足细胞病变，后续有条件可以利用其它肾病模型如IgA肾病，抗肾小球基底膜肾病模型等，继发性肾病如狼疮性肾病模型进一步证实B10细胞的作用。