环状RNA在复发性流产中的功能和机制研究

Circular RNA (circRNA) is a type of RNA that, unlike linear RNA, forms a covalently closed continuous loop.Recently, circRNAs are found to behighly abundant and conserved in human cells. They have been categorized as noncoding RNA with potential as gene regulators.However, the expression, function and mechanism of circRNAs in human villi and decidua tissue of recurrent spontaneous abortions ( RSA) remain unknown. In this study, we will identified a set of circRNAs differently expressed in blood, villi and decidua tissue of RSA by using high-throughput RNA sequencing and bioinformatics analyses. Furthermore, functional assay will been screened by siRNA indicated that some of these RSA-related circRNAs. In this project, we will focus on the expression levels and clinical significance of RSA-related circRNAs as well as their function and molecular mechanism to provide new insights into genetic diagnosis and treatment of RSA in clinic.

环状RNA(Circular RNA, circRNA)是一类非线性，自身成环的RNA分子，最近研究发现它大量存在于人类细胞中。作为一类新的调控性非编码RNA，环状RNA在孕期妇女外周血、胚胎绒毛和蜕膜组织中的存在情况，临床意义，功能和作用机制都还不清楚。本研究前期工作采用RNA芯片，结合生物信息分析，筛选了一些复发性流产组织中差异表达的环状RNA；进一步，拟采用高通量RNA测序筛选外周血、胚胎绒毛和蜕膜组织中差异表达的环状RNA，通过特异siRNA对这些复发性流产相关的环状RNA进行初步的功能筛选，发现其生物学功能。本项目将在前期工作基础上，进一步研究这些复发性流产相关环状RNA的临床意义，以及它们在复发性流产发生过程中所起的功能和作用机制，这些将为复发性流产的发病机制提供新的思路，以及复发性流产的诊疗提供新的候选靶点。

环状RNA( circRNA)是一类非线性，自身成环的调控性非编码RNA，circRNA在孕期妇女外周血、胚胎绒毛和蜕膜组织中的存在情况，临床意义、功能和作用机制都不清楚，申请者前期发现复发性流产（RSA）组织中存在差异表达的circRNA。. 本研究通过高通量测序完成了RSA外周血、绒毛及蜕膜组织全基因组circRNAs表达差异谱的构建；筛选了差异表达的circRNAs 439个、miRNAs 58个和mRNAs 393个。利用RT-qPCR方法验证了候选circRNAs的表达情况。发现hsa_circ_0008362、hsa_circ_0007291 和 hsa_circ_0007769 在 RSA绒毛组织中显著上调（P=0.003、0.017、0.034），hsa_circ_0088485 在 RSA 蜕膜组织中显著上调（P=0.041）。ROC 曲线分析表明 hsa_circ_0088485、hsa_circ_0008362 和 hsa_circ_0007291 的曲线下面积均大于0.5，提示其具有作为组织或血清生物标志物的效能。. 生物学功能研究发现，hsa_circ_0008362 能够影响 HTR-8/SVneo 细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭和细胞周期。hsa_circ_0008362的干扰和过表达以及hsa-miR-324-3p和hsa-miR-767-5p的过表达和抑制实验证实 hsa_circ_0008362 与 hsa-miR-324-3p 和hsa - miR - 767-5p 存在相互作用且可以调控靶基因的表达。hsa_circ_0008362可逆转 hsa-miR-324-3p对 TJP1的调控以及 hsa-miR-767-5p 对 c-fos 和 FOS 蛋白的调控。. 探索circRNAs在RSA发生过程中所起的作用及它们影响疾病表型的机制，为RSA的发病机制及治疗提供了新的思路和方法，为阐明circRNAs的调控机制提供了理论依据。阐明了相关的circRNAs的临床意义，对RSA的临床诊疗具有重要的意义。相关研究成果可为 RSA机理研究及防治方案提供研究切入点，有助于降低孕产期 RSA的风险，提高我国孕产妇健康水平。