人参皂苷Rb1通过调节脂肪组织脂联素的表达与分泌干预非酒精性脂肪肝的机制研究

Ginsenoside Rb1 is a nature compound isolated from Chinese herbs ginseng, which exerts significant effects in improving dysfunction of glucose and lipid metabolism and insulin resistance in obesity and diabetes. In the recent study it was shown to have the ability to decrease the fat accumulation in the liver tissue, reduce liver weight, and improve liver parenchymal cells steatosis. The biological action and its targets related to non-alcoholic fatty liver disease are similar to those of adiponectin. It implies that pharmalogical effects of ginsenoside Rb1 are mediated by adiponectin..In this study, the role of adiponectin in ginsenoside Rb1’s anti-NAFLD property will be explored in adiponectin knockout mice and cell co-cultured of hepatocytes and adipocytes. The adiponectin gene will be silenced by siRNA interference to evaluate the effect of adiponectin in ginsenoside Rb1’s anti-NAFLD. The main aim of this study is to investigate whether adiponectin play a key role in ginsenoside Rb1’s anti-NAFLD effect..The results of this study will be helpful to elucidate the mechanism underlining ginsenoside Rb1’s effects on NAFLD in new viewpoint. It will enrich people’s understanding of ginseng in health benefits, and provide a clue for research on NAFLD in Chinese medicine and for potential mechanism of ginsenoside Rb1 multiple pharmacological actions.

人参皂苷Rb1具有调节糖脂代谢改善胰岛素抵抗的作用，并能够显著减轻脂肪在肝脏组织的蓄积，降低肝脏重量，改善肝实质细胞的脂肪变性。其作用靶点和生物学效应与机体脂肪组织所分泌细胞因子脂联素调控肝脏脂代谢的途径相一致。表明人参皂苷Rb1可能通过上调脂肪组织脂联素的表达与分泌发挥其药理效应。.本课题以脂联素对非酒精性脂肪肝的调控为切入点，体外运用肝细胞与脂肪细胞的共培养及siRNA干扰脂联素的表达，体内运用脂联素敲除小鼠，借助多种分子生物学手段和技术，探明人参皂苷Rb1对NAFLD的干预作用是否由脂联素介导，并明确人参皂苷Rb1对脂联素下游脂质合成与脂肪酸氧化相关蛋白的调控机制。.本研究从新的角度更加深入阐明人参皂苷Rb1干预NAFLD的机制，丰富对人参这一珍贵药材治病养人功效的认识，同时也为人参皂苷Rb1多种药理效应机制研究作出有益探索。

本课题前期研究发现人参皂苷Rb1（G-Rb1）有调节糖脂代谢、改善胰岛素抵抗的作用，尤其是能显著减轻非酒精性脂肪肝（NAFLD）鼠肝脏脂质蓄积；同时研究发现G-Rb1可上脂肪组织调脂联素的表达，脂联素同样有调节糖脂代谢改善胰岛素抵抗减轻肝脏脂质蓄积的作用，因此我们猜测G-Rb1的以上作用是否由脂联素来介导。. 本课题在动物实验部分采用野生C57BL/6野生型鼠及脂联素敲除鼠，研究G-Rb1作用的发挥是否由脂联素所介导。在细胞水平，我们通过将分化成熟的3T3-L1脂肪细胞与棕榈酸诱导的HepG2脂质蓄积模型细胞共培养，对比共培养状态及非共培养状态下人G-Rb1对非酒精性脂肪肝细胞模型的干预作用。.动物水平研究发现，G-Rb1可显著降低野生及敲除鼠NAFLD模型的肝脏重量，显著降低肝脏组织甘油三脂的含量，显示在无脂联素参与的情况下G-Rb1仍能显著改善NAFLD。同时我们发现G-Rb1能够减轻野生鼠附睾脂肪的重量，降低血清中总胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白及游离脂肪酸的含量，显示G-Rb1有抑制脂解的作用。在敲除鼠中，高脂喂养后未见附睾脂肪重量的显著改变，同时G-Rb1作用后也未有显著降低，但G-Rb1仍具有改善血脂的作用。OGTT、ITT实验显示人参皂苷Rb1可显著降低野生模型鼠的曲线下面积，对敲除鼠同样有改善作用，但不具有显著差异；检测空腹胰岛素水平发现，G-Rb1能够降低野生及敲除鼠的胰岛素水平，分别具有极显著和显著差异，结合空腹血糖计算发现G-Rb1可显著降低野生及敲除鼠的HOMA-IR指数，以上结果显示G-Rb1可显著改善NAFLD鼠的胰岛素抵抗，其作用的发挥不完全依赖于脂联素。蛋白水平的检测发现G-Rb1显著上调AMPK的磷酸化水平外还可显著降低脂肪酸转运相关蛋白CD36的水平。细胞水平的研究同样支持以上结论，蛋白检测发现G-Rb1除显著升高AMPK的磷酸化外还可增加ACC的磷酸化水平，并降低SREBP-1c的水平，显示其具有促进β氧化、抑制脂肪酸合成的作用，且对以上蛋白的调控作用不依赖于脂联素。.本研究的科学意义在于证实G-Rb1对NAFLD的干预作用并非由脂联素所介导，并首次发现CD36是其诸多作用靶点之一。