免疫与抗病毒压力下甲型H1N1流感病毒准种演变及其临床意义研究

甲型H1N1流感（以下简称甲流）大流行严重威胁人类健康，病毒快速变异使其危害性明显增加。免疫预防与抗病毒治疗有效降低了甲流的发病率和病死率，同时，免疫与抗病毒压力加速了甲流病毒变异，国内外尚未见有关免疫与抗病毒对甲流病毒变异影响的具体报道。本研究拟采用新型超高通量基因组测序系统（GS FLX 系统）分析免疫应答和抗病毒治疗下甲流危重症患者体内准种的分布及其构成、甲流危重症患者抗病毒治疗状况以及患者体内细胞和体液免疫应答水平与准种演变之间的关系，探讨准种的复杂性和异质性与危重症患者病情及转归之间的关系。通过甲流病毒感染者个体系统内动态的病毒准种演变规律研究，有可能及时发现甲流病毒变异株、探明免疫与抗病毒对甲流病毒变异影响以及危重症甲流致病机制，并为临床抗病毒治疗提供指导，从而为减少甲流危重症病例发生率和降低甲流病死率提供线索。

2009年4月初，墨西哥和美国出现了新型甲型H1N1流感暴发流行，并很快传播到全球200多个国家和地区，2013年3月，中国又先后报道了人感染H7N9禽流感疫情，甲型流感病毒的不断变异和重组，严重威胁了人类健康。本课题系统调查收集甲型H1N1流感病例，分析甲型H1N1流感危重症患者抗病毒治疗与临床转归之间关系，甲型H1N1流感病毒复杂性和异质性与甲型H1N1流感患者病情及转归之间；同时收集新型人感染H7N9流感病例临床资料及相关标本，检测H7N9病毒人群免疫应答水平，以验证甲型H1N1流感免疫应答对危重症病例的影响。我们共收集了3570例危重症甲型H1N1流感病例，最终3486例有效病例，其中3066例(88.4%)有肺炎。在920例成人和541例儿童甲型H1N1流感肺炎的抗病毒研究队列中，平均年龄为26.3岁，男性占55.2%，总住院病死率为3.9%。在发病5天后，不采用抗病毒治疗生存概率锐减，累积死亡率为6.3%（7例），而在发病后48小时内、2-5天和5天后接受抗病毒治疗病例中，分别仅有1、1和0例死亡，其累积发病率都低于0.5%。发病60天后，不采用抗病毒治疗病例中11例（10.8%）死亡，而发病2天内采用达菲治疗病例中4例（1.8%）死亡，发病2-5天采用达菲治疗病例中18人（3.3%）死亡，发病5天后采用达菲治疗病例中23人（3.7%）死亡。通过对新型H7N9禽流感病毒人群免疫应答水平验证调查提示，活禽职业暴露人群H7N9禽流感的血清抗体阳性率高达6.3%，而普通人群中H7N9禽流感的血清抗体阳性率为0。45例H7N9确诊病例中具有较高的抗体阳性率（60%）和抗体滴度，且存活病例组的抗体的滴度显著高于死亡病例组。通过本研究，最终建成最大的含3570例甲型H1N1流感病例的临床数据库，并分析揭示抗病毒治疗可以显著降低H1N1流感患者的死亡率，抗病毒治疗对于男性、14-60岁以及基线氧合指数<200患者有更高的保护性作用；达菲双倍剂量对于体重低于78kg的病例没有额外的保护作用。研究结果对甲型H1N1流感诊疗方案的修订提供了重要依据。通过对H7N9病毒人群免疫应答水平验证调查发现，H7N9感染来源主要是活禽市场，且H7N9病毒在职业暴露人群中有较高的隐性感染率；较高的抗体滴度的存在可能改善H7N9禽流感患者的临床结局。