沙葱多糖对肉羊免疫机能的影响及其机理研究

在前两个国家自然科学基金课题的研究中发现，沙葱及其提取物是通过降低脂肪酸合成酶的活性和提高激素敏感脂酶的活性影响舍饲肉羊胴体脂肪酸的组成，并显著改善羊肉的风味和品质；在沙葱的脂溶性提取物中鉴定出多种异黄酮，并在试验中证明这些有效成分可以显著提高肉羊的特异性和非特异性免疫力。为了充分利用沙葱资源，进一步揭示沙葱的免疫活性成分及作用机理，该项目欲从沙葱水溶性提取物中分离出重要活性成分多糖，确定沙葱多糖提取纯化鉴定的最佳工艺，通过体外和体内试验对纯化的沙葱多糖的免疫机能进行系统研究，采用分子生物学技术，流式细胞术、RT-PCR、双向电泳、质谱技术研究沙葱多糖对淋巴细胞基因表达、细胞周期及信号转导途径的影响，从分子水平探讨沙葱多糖的免疫作用机理。该研究将为沙葱产品的深加工提供广阔的思路，也为以后合成、开发一种天然的免疫增强剂提供科学依据，所以，该研究对肉羊养殖业具有重要的理论意义和广泛的应用前景。

经过热水法提取和活性炭脱色后的沙葱多糖进行柱层析纯化并测定其分子量，采用紫外光谱、纸层析、比旋光度法和凝胶柱层析法检验纯度；硅胶薄层层析、高效液相色谱鉴定单糖组成，红外光谱和核磁共振进行结构解析。结果表明，纯化后的沙葱多糖是一种白色疏松、易溶于水、分子量为5.89×104 D的均一组分中性多糖，是由L-Rha、D-Glc、D-Gal三种吡喃糖构成的杂多糖，糖链的主要连接方式为α- Glc (1→4)、[α-Glc(1→4)- ]n和末端α-Rha。.沙葱多糖体外具有较广普的抗菌活性，尤其对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌效果较为明显。对S180腹水瘤有显著的抑制作用，能够促进正常小鼠的特异性和非特异性免疫功能，能通过诱导免疫细胞产生相关细胞因子及促进细胞因子在mRNA水平的表达来调节动物的免疫机能。.沙葱多糖能够提高肉羊血清和肝脏抗氧化酶活性，降低体内脂质过氧化产物的含量；提高肉羊血清IL-2、IL-6及IgG、IgM含量以及CD4+细胞数量和CD4+/CD8+比值、血清ACP活性及溶菌酶含量，从而达到提高机体的抗氧化能力和免疫机能的作用。研究还发现，在肉羊日粮中添加沙葱多糖，能够提高肉羊生长性能和相关血液生化指标的水平。通过提高肉羊肠道slgA含量，改善肠道粘膜形态结构和菌群状况，从而促进肉羊健康生长，完善肠道粘膜免疫系统，增强肉羊机体免疫功能。综合各项指标，在舍饲肉羊日粮中添加0.09%-0.12%的沙葱多糖其效果最佳。.随着作用时间的延长和多糖浓度的增加，沙葱多糖可显著提高淋巴细胞内cAMP和cGMP含量、降低cAMP /cGMP比值。低浓度的沙葱多糖可抑制淋巴细胞分泌NO，降低淋巴细胞内iNOS活性；高浓度沙葱多糖的作用与此相反。所以，沙葱多糖对外周血淋巴细胞信号转导具有促进作用，且具有剂量依赖性。沙葱多糖作用前期（24h内），低浓度的沙葱多糖抑制淋巴细胞增殖，高浓度的沙葱多糖促进淋巴细胞增殖；在多糖作用后期（48h~72h），随着时间的延长和多糖浓度的升高抑制淋巴细胞增殖。沙葱多糖各剂量组对淋巴细胞周期变化无明显作用。沙葱多糖在体外能促进淋巴细胞分泌IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ及STAT1，并提高其 mRNA的表达量。可见，沙葱多糖能通过诱导淋巴细胞产生相关的细胞因子及促进细胞因子在mRNA水平上的表达来调节动物的免疫功能。