妊娠期妇女唾液中糖蛋白糖链变化及其与禽流感病毒易感关联性研究

Highly pathogenic avian influenza virus infection seriously endangers the lives of Pregnancy women and the safety of the fetus, timely prevention and screening of avian influenza virus infection to them is particularly important. It is known that as the body's first line of immune barrier, the glycoprotein in saliva can provide terminal sialic acid to bind with the hemagglutinin on influenza virus, and play important role in resisting influenza virus. Related studies have shown that it is possible to tell which people are susceptible to the avian influenza virus through saliva analysis. Early study carried out in out lab showed that compared with the healthy non-pregnant women in the same ages, the expression level of Siaα2,3Gal glycochain structure in mid pregnancy women saliva declined obviously, which may negatively affect their ability to neutralize avian influenza virus. In this research, we plan to use lectin microarray technology to comprehensive study on the characteristics and alteration of protein glycosylation expression in the women saliva during the full process of pregnancy and postpartum. The saliva chip, lectin imprinting and influenza virus West blotting will be used accordingly, in order to make clear the susceptibility of pregnancy women to avian influenza virus during the early, mid, late trimesters and the recovery time after childbirth. This research will provide the experimental basis , and help to find effective method to protect the high-risk groups such as pregnant women from avian influenza virus infection.

妊娠期妇女感染高致病禽流感将会对其自身生命及胎儿安全造成严重威胁，对该群体建立有效的禽流感预防和筛查方法尤为重要。研究表明唾液作为人体的第一道免疫屏障，其中的糖蛋白可以通过提供末端唾液酸糖链与流感病毒血凝素结合，发挥重要的抵御流感病毒的作用，相关研究已表明通过唾液检测，区分流感易感人群在理论上具有可行性。本实验室前期对妊娠中期妇女唾液中糖蛋白糖链进行了初步研究，结果发现与同年龄段健康未怀孕女性相比，妊娠中期妇女唾液中能够中和禽流感病毒的Siaα2,3Gal糖链表达明显降低。本项目拟利用凝集素芯片技术进一步对妊娠早、中、晚各期以及产后妇女唾液中糖蛋白糖链表达特征及其变化进行全面研究，同时运用唾液芯片、凝集素印迹、禽流感病毒West blotting等实验加以验证，以期明确妊娠各期妇女对禽流感病毒的易感性及其产后恢复时间，为禽流感的有效预防提供新的思路和实验基础。

在流感爆发季节，妊娠期妇女群体已被证实为流感高危人群，但其分子机制目前尚不明确。本项目主要研究了妊娠期及产后女性唾液中糖蛋白糖链变化及其对禽流感病毒结合能力的影响。实验共采集19-35岁未怀孕健康女性唾液、孕期女性唾液以及产后哺乳、未哺乳女性唾液样本1250例。首先对各组混合唾液样本进行了凝集素芯片分析，结果表明随着孕程的发展，妊娠及哺乳期女性唾液中凝集素SNA识别的SAα2-6糖链（主要结合人流感病毒）表达水平没有明显变化，而MAL-II识别的SAα2-3糖链（主要结合禽流感病毒）表达水平却发生了较大波动，后者在妊娠中、晚期表达显著下调(fold change=0.53 and 0.37, p<0.001)，产后一至两年内逐渐趋于恢复；此外产后早期（产后0-6月）哺乳组女性唾液样本中SAα2-3糖链结构表达水平显著高于未哺乳组(fold change≥7.69, p<0.001)，随着产后时间的延长两者之间的表达差异逐渐减少。随后，在各实验组中分别随机选取个例样本进行了唾液芯片验证，结果显示SAα2-3/6糖链表达变化与凝集素芯片基本一致，产后中期SAα2-3糖链表达水平有所回落，与该时间段哺乳率大幅减少相关。将各组混合唾液样本分别与三株禽流感病毒H5N1-CK、H5N1-DK、H9N2以及H1N1裂解疫苗进行识别结合实验，结果表明，随着SAα2-3糖链表达水平的降低，孕中、晚期女性唾液识别结合禽流感病毒的能力显著降低，产后哺乳组女性唾液识别结合禽流感病毒的能力较未哺乳组女性唾液高。最后应用MALDI-TOF/TOF-MS技术对孕期女性糖链结构进行解析，结果发现妊娠中晚期女性唾液中含有SAα2- 3末端的唾液酸糖链数量及含量均低于健康未怀孕对照组。综上所述，本项目研究表明，妊娠中、晚期女性唾液中SAα2-3糖蛋白糖链结构显著降低，从而使其对于禽流感病毒易感性增加，产后一至两年逐渐恢复到正常水平；产后哺乳有利于增强母体对禽流感病毒的抵抗能力。本项目结果为妊娠期女性禽流感易感机理的深入研究以及禽流感预防和筛查工作提供了新的思路和理论依据。