WSSV p27启动子12-bp基序结合蛋白的提纯和分子定性

虾白斑病是对养虾业危害最为严重的传染病，病原是虾白斑病病毒（WSSV）。该病毒的遗传进化位置独特，没有任何线索对其复制周期中的转录调节进行研究。我们在前面的研究中发现一个泛活性的WSSV强启动子，它驱动立即早期基因p27的表达；功能性研究表明，该启动子TATA盒远端的一个12-bp序列是决定其活性的主要元素。本研究用Self-primed PCR 方法制备含数百个12-bp重复的DNA分子，将其偶联到一种磁性颗粒上，采用DNA亲和层析法提取该12-bp 结合蛋白，进而用生物质谱分析方法确定该蛋白的来源、肽链氨基酸排序、分子大小、以及二硫键和糖基化位点的数目和位置等。该研究的目标是，提纯与12-bp基序相互作用的细胞转录因子、并用质谱分析对该蛋白进行分子定性，为进一步研究p27基因表达乃至WSSV复制的转录调节以及建立WSSV药物筛选平台打下基础。