TLR4新有义突变2287C>T功能研究与急性胰腺炎发病个体化

重症急性胰腺炎(SAP)病死率仍居高不下，是世界范围内的医学难题。本项目基于对急性胰腺炎(AP)的临床观察：同样病因、病情或治疗，个体出现不同AP/SAP发病、发展或转归，提示AP/SAP具有与炎症始动及进展相关，决定其归属的内在个体差异。TLR4作为机体炎症免疫的重要分子，其在AP炎症发生发展中的重要作用已获证实；单核苷酸多态性(SNP)是疾病个体差异的基础。我们前期在中国AP/SAP患者中，发现并登陆了TLR4新SNP有义突变2287C>T(Arg763Cys)，预试证明该突变可致TLR4胞内区关键蛋白结构功能改变,从而中断下游炎性信号传导。本项目针对此突变位点，采用突变基因敲入动物及细胞离体实验，通过免疫共沉淀、酵母双杂交、荧光定量PCR等方法，对突变基因功能进行深入研究，探索AP/SAP病程中个体化差异的内在分子病理基础，为临床AP/SAP的预防、预测及个体化治疗提供实验研究依据。

重症急性胰腺炎（SAP）发病率逐年上升，病死率居高不下，是世界范围内的医学难题；同时，SAP在治疗监护过程中花费高昂，消耗大量医疗资源，使SAP的临床诊治及相关发病机理探索日益受到重视。尽管目前急性胰腺炎(AP)向SAP转化的原因尚不清楚，但临床现象提示：AP/SAP具有较强的发病个体化差异。我们前期在中国急性胰腺炎病人中筛选出人TLR4基因2287C>T的有义突变并通过生物信息学软件预测结果，提出该位点可能阻断TLR4信号通路的传导，继而可能是AP/SAP病程中个体差异化的内在基础之一。本课题进一步在中国重症急性胰腺炎病人中筛选出人TLR4 TIR结构域另外4个新SNP(2143G>A、2247A>T、2410C>T、2467C>A)。目前已发现这5个新SNP位点均为有义突变且全部位于TLR4 TIR结构域，并且含有这5个新的SNP位点的病人均为重症急性胰腺炎患者。对上述SNP进行功能实验发现，其中2467C>A突变对TLR4信号通路无影响，2410C>T, 2143G>A，2287C>T都对TLR4信号通路产生一定程度的阻断，其中2410C>T阻断作用最强，2143G>A和2287C>T次之。本项目结果对揭示AP向SAP转化的部分个体化差异以及临床AP/SAP的预防、预测及个体化治疗提供新的参考依据。