AEG-1基因介导非小细胞肺癌血管生成的分子机制研究

肺癌发生、发展中血管生成的作用及分子机制是该领域的研究热点。AEG-1介导肿瘤血管生成的作用日益引起重视。我们前期研究发现AEG-1与肺癌血管生成密切相关,且介导VEGF表达。本课题拟利用具有从支气管粘膜增生、鳞状化生、不典型增生、原位癌、浸润癌到转移癌的大鼠肺癌模型对AEG-1进行动态研究,探讨AEG-1与肺癌发生、发展和血管生成的关系。采用慢病毒转染和RNA干扰技术，分别上调和下调肺癌细胞AEG-1表达，检测PI3K/Akt/mTOR和RAS-Raf-MEK-ERK通路活性及对VEGF表达的影响；并用CHIP技术探索AEG-1与靶基因作用模式，通过血管生成三维模型观测AEG-1对血管内皮细胞的作用，探明AEG-1促进肺癌血管生成的分子机制，为肺癌靶向治疗提供实验依据。结合临床标本研究，分析肺癌组织中AEG-1表达与临床病理参数的关系，为AEG-1作为肺癌早期诊断和预后判断指标奠定基础。

本研究利用二甲胆蒽成功构建了大鼠肺癌模型，并通过病理组织学确证。利用PCR、WB检测了AEG-1与癌变阶段、血管生成、PI3k/Akt/mTOR 和RAS-Raf-MEK-ERK通路, 检测肺癌发生各阶段AEG-1 mRNA、蛋白的变化， 我们发现，随着病变程度的加重，AEG-1、VEGF、Akt等关键分子的表达水平随之升高，与支气管上皮增生、不典型增生、原位癌相比，浸润癌组织中的微血管密度最高，而且与AEG-1、VEGF表达水平呈正相关，这提示AEG-1在肿瘤血管生成中起着重要的作用。.随即我们构建了AEG-1过表达和干扰下调的稳定转染细胞株，WB和PCR证实，当AEG-1G过表达时，VEGF、MMP-2、LASP-1及TLR-4表达也升高，进一步研究证实AEG-1通过下调miR-203a-3p而促进LASP-1和TLR-4的表达，当以上这些基因表达增高时，可以促进肿瘤细胞的转移和血管生成。