脂氧素A4调控ILK信号通路抑制EMT抗胚胎着床的机制研究

Recent studies show that EMT has a close relationship with embryo implantation, and ILK play an important role in EMT. However, the underlying mechanisms are still unclear. Our previous studies showed that LXA4, a stop signal of inflammation, had an inhibitory effect on embryo implantation, and could regulate ILK and inhibit EMT. Our studies will prove the effect of LXA4 on EMT, and embryo implantation via ILK pathway. In vivo experiments, we investigated the effect of LXA4 on the embryo implantation and the correlation with ILK expression. In vitro experiments, we investigated the effect of LXA4 on EMT, and the expressions of ILK and downstream molecules, and the correlation between them. In RNA interference experiments, we investigated the inhibitory effect of LXA4 on embryo implantation by silencing ILK or FPR2 to illustrate whether the anti-embryo implantation effect of LXA4 was ILK or FPR2-dependent. The aim is to illustrate the mechanisms of anti-embryo implantation effect of LXA4 and provides the theoretical foundation for new contraceptives.

新近研究表明上皮-间质转化（EMT)与胚胎着床密切相关；整合素连接激酶(ILK)在EMT过程中扮演重要角色。然而，目前其机制尚不十分清楚。我们前期工作发现炎症的刹车信号- - 脂氧素A4 (LXA4)具有抗胚胎着床功能，抑制ILK 活化和抑制子宫内膜和滋养细胞EMT 等，因此，推测LXA4 可能通过调控ILK 信号通路抑制EMT抗胚胎着床。以动物模型观察LXA4对胚胎着床的影响及其与ILK，EMT表达变化的关系；体外实验观察LXA4 对滋养层细胞EMT 的影响和该过程与ILK 及下游分子表达的关系；RNA 干扰实验在细胞及动物模型上观察ILK、脂氧素受体（FPR2）的缺失表达与LXA4 抗胚胎着床的关系，阐明LXA4 的抗胚胎着床作用是否为ILK 和FPR2 依赖，旨在进一步揭示LXA4 抗胚胎着床的分子机制，为开发新的避孕药物提供理论基础。

研究表明上皮-间质转化（EMT)与胚胎着床密切相关；整合素连接激酶(ILK)在 EMT 过程中扮演重要角色。然而，目前其机制尚不十分清楚。。我们前期工作发现炎症的刹车信号——脂氧素 A4 (LXA4)具有抗胚胎着床功能，因此，推测 LXA4 可能通过调控 ILK 信号通路抑制 EMT 干扰胚胎着床。获得国自然基金资助后，基本按照原计划进行。本研究以体内试验及细胞实验探讨LXA4 调节ILK 信号转导通路抑制EMT干扰胚胎着床的机制，具体做了以下几方面的研究：.1. LXA4抗胚胎着床有时效性和量效性，在小鼠受精后的第24小时后连续3天腹腔注射LXA4 (10 ug/kg/天)是导致胚胎着床失败的最有效时间和剂量。.2. LXA4组动情周期为120.0±17.4小时，对照组126.1±20.4小时，无显著差异，LXA4不影响小鼠的动情周期。LXA4管理的小鼠着床失败后30.8±4.8天后能够成功妊娠并分娩活胎。.3. 小鼠受精后的第 96 小时的子宫内膜、宫内胚胎组织的HE染色检查发现正常小鼠着床时，子宫内膜细胞间的紧密连接丧失，细胞间变得松散、水肿，腺体增生，腺体与间质发育同步；LXA4作用后，小鼠着床时的子宫内膜细胞紧密连接，降低子宫内膜间质水肿，腺体增生减少，腺体和基质发育不同步。表现在分子水平，LXA4能抑制MMP9和VEGF，影响细胞外基质的降解和重塑；LXA4抑制 Vimentin，fibronectin，促进β-catenin的表达，抑制胚胎着床EMT；LXA4抑制ILK的表达并且抑制ILK下游因子Akt，Gsk-3β和NF-κB的表达；LXA4明显上调FPR2的表达，TEV-1细胞过表达FPR2时，明显抑制ILK的表达。. 本课题证实LXA4通过FPR2抑制ILK并影响其下游多种因素（MMP9，VEGF，β-catenin，Vimentin，Akt等）干扰胚胎着床。阐明LXA4干扰胚胎着床的新的分子机制，为提高胚胎着床率或抗着床措施提供线索，且有望开发出新型避孕药物。项目资助发表论文5篇，待发表1篇。