BDNF-TrkB在水杨酸盐致耳鸣中的作用及机制研究

外周听觉系统功能的改变可引起听觉相关神经元的可塑性改变，而耳鸣的发生极有可能与听觉系统的可塑性密切相关。前期研究中，我们成功建立了耳鸣动物模型并发现长期注射水杨酸钠能引起耳蜗外毛细胞能动性增强并导致耳蜗神经自发电生理活动增强。本研究拟运用动物耳鸣行为学检测法及电生理学方法对耳鸣动物进行筛选，通过动态同步观察分析长期注射水杨酸钠过程中和停止注射后大鼠听觉通路各层面（耳蜗、下丘、耳蜗核、听皮层等）组织中BDNF-TrkB及c-fos的表达，并与动物行为学（出现耳鸣）的时间相位进行对比，寻找其内在对应关系。同时对GABA/GABAR及KCC2的表达进行检测，进一步阐明该通路在水杨酸钠致耳鸣产生中的可能机理。此外，采用可埋植多导硅电极技术在单细胞水平对听觉中枢神经元的功能改变进行连续动态观察，进一步探讨中枢可塑性变化在水杨酸钠致耳鸣机制中的作用，为耳鸣及相关内耳疾病的诊断和治疗提供新思路。

外周听觉系统功能的改变可引起听觉相关神经元的可塑性改变，而耳鸣的发生极有可能与听觉系统的可塑性密切相关。前期研究中，我们发现长期大剂量注射水杨酸钠能引起耳蜗外毛细胞能动性增强并导致耳蜗神经自发电生理活动增强。在此基础上，本研究采用耳鸣行为学检测法方法对实验动物是否存在耳鸣进行了验证，同时对长期注射水杨酸钠过程中和停止注射后大鼠下丘及听皮层组织中与中枢可塑性密切相关的因子BDNF、TrkB、c-fos、 GABAA及GAD67的的表达进行检测，并与动物行为学（出现耳鸣）的时间进行对比。进一步探讨水杨酸钠致耳鸣的可能机理。研究表明：1）长期注射水杨酸钠连续7天及14天，动物条件反射消退期明显缩短，表明其存在耳鸣。而慢性恢复7天开始，到14天、28天实验动物条件反射消退期时间延长，表明耳鸣趋于消失。2）长期注射水杨酸钠组下丘及听皮层组织中c-fosmRNA及蛋白量的表达均高于正常组，差异有统计学意义（P＜0.05）；c-fos 表达的增高与实验动物耳鸣存在的时间吻合。3）长期注射水杨酸钠组下丘及听皮层中BDNF及TrkB mRNA及蛋白量的表达均高于正常组，差异有统计学意义（P＜0.05）；表明长期注射水杨酸钠可能通过上调大鼠听皮层BDNF及TrkB的表达，使听皮层神经营养因子的功能增强，进而导致听皮层的功能重塑。4）长期注射水杨酸钠组下丘及听皮层组织中GAD67、GABAAα1 mRNA及其蛋白表达水平均较对照组明显升高，差异具有显著统计学意义（P＜0.01）。长期注射水杨酸钠导致中枢GABA抑制作用降低，当兴奋与抑制效应失衡时，会引起听觉中枢神经活性增强。于是表现为耳鸣。而GAD67及GABAAa1的增高可能是一种负反馈代偿去抑制的失衡状态，促进抑制性效应的产生。此外，我们采用玻璃微电极记录技术在单一神经元水平对听皮层神经元电生理活动进行了初步探讨，急性注射水杨酸钠组大鼠听皮层神经元中对声刺激表现为持续性反应的神经元的存在可能与其导致的耳鸣密切相关。