GCRV外衣壳蛋白VP5自动裂解位点的功能研究

为探讨GCRV外衣壳蛋白VP5在病毒进入细胞过程中的作用机理，对与起始侵染相关的VP5蛋白自动裂解位点的功能进行研究。实验拟采用原核表达系统，获得高效表达的GCRV外衣壳蛋白VP5及与包涵体形成相关的非结构蛋白NS80，免疫动物，制备特异抗体。通过定点突变技术，对VP5自动裂解位点的编码序列进行突变，并在杆状病毒中表达VP5蛋白突变体（VP5N42mu）。将体外表达的外衣壳蛋白VP5突变体（VP5N42mu）和野生型VP7蛋白（VP7wt）与纯化的GCRV核衣壳组装成突变型重构GCRV颗粒（VP5mur-GCRV）。利用免疫荧光及流式细胞等分析技术，比较突变型VP5mur-GCRV与野生型VP5wtr-GCRV重组病毒的细胞感染与蛋白合成等特性差异，揭示VP5N42功能位点的变异对病毒组装与感染特性的影响，为进一步揭示VP5蛋白在病毒侵染过程中致病的分子机理提供依据。