细胞自噬在化疗相关性疲劳中的作用及益气除痰方的调节效应

The chemotherapy-related fatigue affects the people with cancer and the survives seriously. The clinical prevention and treatment is difficult for the reason of the mechanism about it is not clear. Our previous research showed that the chemotherapy-related fatigue model showed abnormal structure and dysfunction of skeletal muscle,we also found that through regulating downstream mTOR and AMPK pathway could enhance autophagy level and affect skeletal muscle function. In this study,we will detect the expression level of autophagy and the mTOR, AMPK signal pathway via electron microscopic perspective, a real-time quantitative RT-PCR, Western blot and other technical methods, definite the mechanism of the chemotherapy-related fatigue.Then eliminate the effect of the traditional Chinese medicine yiqi Chu Tan prescription on skeletal muscle cell autophagy and the mTOR, AMPK pathway via the gene expression, siRNA technology, observe if there have any change in the regulation of skeletal muscle cells autophagy, to make clear the targets of Yi Qi ChuTan prescription.

流行病学调查显示，化疗相关性疲劳严重影响患者的生存质量，然而目前对它的发生机制知之甚少，临床上也缺乏公认的治疗药物。前期研究发现化疗相关性疲劳存在能量代谢紊乱导致骨骼肌损伤，但具体机制不清。我们推测化疗药物有可能是通过调控与能量代谢相关的mTOR、AMPK信号通路，诱导骨骼肌细胞自噬的发生，导致化疗相关性疲劳的产生。本项目拟在前期研究的基础上，以化疗相关性疲劳小鼠动物模型和骨骼肌细胞为研究对象，利用透视电镜、实时定量RT-PCR、Western blot等技术方法，检测细胞自噬表达水平、mTOR、AMPK相关通路信号分子的表达和活性，明确化疗相关性疲劳发生的分子机制。同时观察中药益气除痰方对骨骼肌细胞自噬mTOR、AMPK相关通路的影响，采用基因过表达、siRNA 等技术消除益气除痰方对这些阳性通路的影响，观察益气除痰方对骨骼肌细胞自噬的调节作用的变化情况，以明确益气除痰方作用的靶点。

随着肿瘤早期诊断、早期治疗、综合治疗等诊疗技术的进步，化疗相关性疲劳已经成为影响肿瘤患者生存质量的主要不适之一。然而，至今尚未阐明化疗相关性疲劳发生的原因及机制，为其防治带来困难。因此，如何防治化疗相关性疲劳是目前亟待解决的重要课题之一。.本研究通过体内外实验的探索，证实了化疗药物通过对骨骼肌细胞造成毒性伤害，促进其发生氧化应激反应，导致过氧化产物在骨骼肌细胞中的堆积，从而激活AMPK/Raptor/mTOR信号通路，激活线粒体自噬蛋白BNIP3,诱导骨骼肌细胞线粒体自噬的过度发生，最终导致化疗相关性疲劳的产生。通过本研究，进一步深入解析化疗相关性疲劳这一重要问题的分子机制，对今后临床干预化疗相关性疲劳，提供了理论依据。.本研究还利用有确切疗效的中药益气除痰方作为干预手段，证实了益气除痰方可以通过改善氧化应激反应，减少骨骼肌细胞过氧化产物的形成，抑制AMPK/Raptor/mTOR信号通路，下调线粒体自噬相关蛋白BNIP3、自噬相关蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1，上调p62的表达，抑制骨骼肌细胞线粒体的过度自噬，从而发挥防治化疗相关性疲劳的作用。此外，本研究还发现益气除痰方具有改善荷瘤裸鼠的一般状况、体重、生存质量、抑瘤增敏等作用。对中药防治化疗相关性疲劳机理理论的创新具有一定的补充及推动作用，为临床应用中医药防治肿瘤相关不良反应提供了科学依据，同时也对今后临床干预化疗相关性疲劳，提高肿瘤患者生存质量具有重要的现实意义。.