miR-19b致胚胎心脏畸形的机制研究

miR-19b是我们应用下一代测序技术、结合miRNA芯片，筛选发现的一条在左心发育不良流产胚胎心肌组织中表达显著上调的miRNA。前期发现：miR-19b过表达可致斑马鱼出现心脏畸形表型；生物信息学预测Wnt1是miR-19b的靶基因，我们则发现畸形胚胎心肌组织中Wnt信号通路也明显受抑（Wnt1表达下调、GSK3β表达上调），提示miR-19b致胚胎心脏发育畸形的机制与Wnt信号通路有关。本研究拟：在体观察miR-19b过表达、表达沉默与斑马鱼胚胎心脏畸形、Wnt信号通路变化间的关系；以Wnt信号通路为切入点，结合吗啡啉修饰的反义寡核苷酸技术和过表达技术，评判miR-19b致胚胎心脏发育畸形的机制；采用荧光素酶报告基因技术，揭示miR-19b对Wnt1的分子调控机制。miR-19b致胚胎心脏发育畸形及机制研究未见报道，本研究有源头创新性，可为早期先心病的防治提供新线索和潜在的干预靶标。

miR-19b是我们应用下一代测序技术、结合miRNA芯片，筛选发现的一条在左心发育不良流产胚胎心肌组织中表达显著上调的miRNA。本项目在前期发现miR-19b过表达可致斑马鱼出现心脏畸形表型的基础上，以Wnt信号通路为切入点，结合吗啡啉修饰的反义寡核苷酸技术和过表达技术，评判miR-19b致胚胎心脏发育畸形的可能机制。研究发现：①构建miR-19b过表达载体，通过P19细胞转染研究发现miR-19b过表达引起心肌细胞损伤； miR-19b过表达降低了Wnt信号通路中Wnt和β-catenin的表达水平，增加了GSK3β的表达水平。荧光素酶报告基因实验证实miR-19b通过Wnt1的 3′ UTR区而发挥作用；②通过斑马鱼实验，结果显示过表达miR-19b导致斑马鱼出现心包水肿，心脏环化不完全，心房、心室结构异常；③通过下一代测序筛选孕期CHD胎儿母血清差异miRNAs，并通过Real-time PCR验证这些差异表达的miRNAs，结果表明联合4个miRNAs（miR-19b、miR-22、miR-29c、miR-375）可以预测胎儿CHD的发生风险，AUC为0.81。本研究为早期先心病的防治提供新线索和潜在的干预靶标。