分泌颗粒酶B的Breg细胞在系统性红斑狼疮中免疫调控机制的研究

Systemic lupus erythematosus (SLE) is a chronic and systemic autoimmune disease, which is accompanied by abnormal activation of T/B lymphocytes, multiple autoantibodies and immune complex deposition. Granzyme B producing (GrB+) Breg cells are a group of new regulatory B cell subsets, which can participate in the pathogenesis of autoimmune disease by inhibiting CD4+T lymphocytes activation and differentiation. In this project, specific biomarkers of GrB+Breg cells will be screened and identified by FACS and RNA-seq technology. Then, GrB knockout mice will be used to study the immunoregulatory roles of GrB+Breg cells on T lymphocytes and monocytes. We will also investigate the frequency and functions of GrB+Breg cells in SLE patient peripheral blood and renal.In summary, this study will explore the regulatory roles of GrB+Breg on immunocytes in pathogenesis of SLE by molecular, cellular and animal model. The results may provide new evidence for the exploration of new therapeutic targets in SLE.

系统性红斑狼疮（SLE）是一种慢性系统性自身免疫病，发病过程中有明显的T/B淋巴细胞异常活化、多种自身抗体产生及免疫复合物沉积，最终导致机体多器官的免疫损伤。前期研究提示，分泌颗粒酶B(GrB)的Breg细胞是一群新型的Breg细胞亚群，可能通过抑制T淋巴细胞的活化与分化参与自身免疫病的发生。本课题将在前期工作的基础上应用FACS与RNA-seq技术，筛选并鉴定GrB+Breg细胞的特异性分子标志物；利用GrB基因敲除小鼠，探讨GrB+Breg细胞在体内外对NaïveT淋巴细胞和CD14+单核/巨噬细胞的免疫调节功能；研究GrB+Breg细胞在SLE患者外周血及肾脏中的表达意义及免疫调节功能；进而从分子水平、细胞水平及动物模型三个层面，探讨GrB+Breg细胞在SLE发病中对免疫细胞的调控作用，为深入理解SLE的发病机制及寻找新的治疗靶点提供实验依据。

【研究背景】系统性红斑狼疮（SLE）是一种慢性系统性自身免疫病，发病过程中有明显的T/B淋巴细胞异常活化、多种自身抗体产生及免疫复合物沉积，最终导致机体多器官的免疫损伤。研究提示，分泌颗粒酶B的Breg细胞（GrB+Breg）可能通过抑制T细胞的活化与分化参与SLE的发生。.【研究内容】1.SLE患者外周血中GrB+Breg细胞的表达及其与SLE临床特征及实验室指标相关性。2.SLE患者中GrB+ Breg细胞的免疫调节功能。3.狼疮样模型小鼠脾脏GrB+Breg细胞的表达。4.狼疮样模型小鼠中GrB+Breg细胞对T细胞亚群分化的作用。5.GrB在狼疮样模型小鼠发病中的作用。6.SLE患者外周血中穿孔素（PFP）+B细胞的表达及临床意义。.【研究结果】1.SLE中GrB+Breg细胞的比例显著降低，且与SLE患者的PLT、ESR及SLEDAI评分分别呈显著的负相关。2.SLE中GrB+ Breg细胞对Naïve T细胞向Th1、Th2及Th17细胞分化的抑制作用减弱。3.SLE中GrB+ Breg细胞促进T细胞TCR zeta（TCR-ζ）链降解和T细胞凋亡的功能减弱，提示GrB+ Breg细胞的免疫调节功能受损，可能是SLE发病的因素之一。4.小鼠脾脏CD19+B淋巴细胞可表达及分泌GrB，并可通过促进T淋巴细胞凋亡和TCR-ζ链的降解进而抑制效应T细胞分化为Th1细胞、Th17细胞；狼疮样模型小鼠中GrB+Breg细胞的比例显著下降，且其对效应T细胞的免疫调节功能受损，可能参与了狼疮样模型小鼠的发病过程。5.GrB对bm12脾脏淋巴细胞诱导的狼疮样模型小鼠的发病无显著影响。6.SLE患者外周血B细胞中PFP+B细胞的比例显著降低，且与SLE患者的CRP、IgA及SLEDAI评分呈显著的负相关。.【科学意义】本研究为探讨SLE发病机制提供了新思路，也为GrB的靶向治疗提供了基础研究依据，具有一定的应用前景。