阿魏酸通过RhoA/Rho-kinase信号通道降低肝硬化门脉压力的分子机制

门脉高压是肝硬化的主要并发症，病死率达40%以上。降低门脉压力是治疗肝硬化门脉高压的主要目标。目前治疗门脉高压的主要药物为血管收缩剂，这类药物通过减少内脏血流量，间接降低门脉压力，但疗效不理想。研究证实阿魏酸可以显著降低肝硬化患者的门脉压力，但其机制不明。申请者已证实 RhoA/Rho-kinase信号通道参与了肝硬化门脉高压的形成。该通道活化需要胆固醇合成过程中的中间产物法尼基蛋白，而阿魏酸可以抑制胆固醇的合成。由此我们推测，阿魏酸通过抑制法尼基蛋白的合成，阻止RhoA/Rho-kinase信号通道的激活，从而降低门脉压力。本课题将以RhoA/Rho-kinase通道为切入点，以肝硬化门脉高压大鼠、人和大鼠的肝星状细胞为研究对象，探讨阿魏酸对参与肝内血管舒缩和肝星状细胞激活、凋亡的信号通道的影响，揭示阿魏酸直接降低肝硬化门脉压力的分子机制，希望为临床治疗肝硬化门脉高压提供新的思路和途径。

背景和目的：门脉高压是肝硬化的主要并发症，降低门脉压力是治疗肝硬化门脉高压的主要目标。研究证实阿魏酸可以显著降低肝硬化门脉高压的形成。RhoA/Rho-kinase信号通路参与了肝硬化门脉高压的形成，该通道活化需要胆固醇合成过程中的中间产物法尼基蛋白，而阿魏酸可以抑制胆固醇的合成。本课题旨在研究阿魏酸通过RhoA/Rho-kinase信号通路降低肝硬化门脉压力的具体分子机制。以经过阿魏酸治疗的肝硬化门脉高压大鼠以及分离培养的大鼠和人的活化HSC为研究对象，分别从整体水平、组织水平、细胞和分子水平来研究阿魏酸降低肝硬化门脉压力的分子机制。.方法：建立胆管结扎的大鼠肝硬化门脉高压模型，原位肝灌注研究阿魏酸治疗对肝硬化门脉高压大鼠肝内阻力及甲氧明阻抗的影响。检测阿魏酸治疗对大鼠肝内RhoA、Rho-kinase和eNOs在mRNA和蛋白水平表达的影响。采用大鼠及人肝星状细胞系（HSC）用Pull-Down Assay检测阿魏酸及GGPP(香叶基香叶基焦磷酸为RhoA活化所必需的烯化物)对HSC RhoA活性的影响，用胶原晶格收缩法检测阿魏酸及GGPP对HSC收缩能力的影响，用流式细胞术检测阿魏酸对HSC增殖和凋亡的影响。（由于2010年以来我国器官移植政策的变化，导致我院肝移植手术例数急剧下降，用于实验的人肝脏组织标本难以达到实验所需数量，为保证实验顺利进行，以大鼠肝星状细胞系T6和人肝星状细胞系LX-2代替原代培养的肝星状细胞用于细胞分子生物学实验）.结果：阿魏酸能降低肝硬化门脉高压大鼠肝内阻力。阿魏酸钠治疗后大鼠肝脏组织内RhoA/Rho-kinase通路被抑制，而活化NO/cGMP/PKG通路。阿魏酸抑制HSC中活性RhoA表达但不影响总RhoA表达，而GGPP能逆转阿魏酸对活性RhoA的抑制作用。阿魏酸处理能抑制HSC收缩性，GGPP能阻断这种抑制作用。阿魏酸促进了HSC的凋亡，而对HSC的增殖无明显作用。.结论：阿魏酸通过抑制RhoA/Rho-kinase信号通路，抑制肝内血管收缩、促进肝内血管舒张降低肝硬化门脉压力。同时，阿魏酸可通过干预RhoA/Rho-kinase信号通道促进HSC的凋亡。为临床治疗肝硬化门脉高压了提供新的思路。