基于性腺轴负反馈调节途径探讨哈蟆油复方对卵巢功能的保护作用

围绝经期的特征之一是卵巢衰老。卵巢功能衰退，渐趋停止排卵，卵泡闭锁，雌激素分泌减少，机体进入围绝经期，出现各种临床症状。其具体机制，目前尚不十分清楚。我们在以往的研究中已经证实，治疗围绝经期综合征的哈蟆油复方（YFN）能升高去卵巢模型大鼠血清E2水平，升高子宫、肾上腺指数，调节下丘脑、垂体和血浆β内啡肽、5羟色胺、去甲肾上腺素和多巴胺含量。也就是说，YFN在作用于摘除卵巢的动物时，能通过改善下丘脑-垂体-性腺轴的神经内分泌功能，调节外周血激素水平，改善围绝经期症状。那么YFN是否也直接影响卵巢功能，反馈性作用于性腺轴各个环节尚无证据。本课题拟进一步研究YFN作用于其中最重要的环节- - 卵巢的具体调节机制，阐明神经内分泌免疫网络学说与围绝经期综合征病理诸环节的关系；并通过研究YFN作用后卵巢的各种机能变化和性腺轴的具体信号转导，探讨中药治疗围绝经期综合征、对抗卵巢衰老的机制。

雌性动物进入围绝经期的特征之一是卵巢的衰老。益妇宁(YFN)为治疗妇女围绝经期综合症（PMS）的中药复方，由君药哈蟆油（OR）和臣药莪术组成，具有补肾益精，调和气血，消积祛浊之功效。本课题通过自然衰老大鼠模型研究YFN对抗围绝经期卵巢衰老的药理功效，并进行了相关机制研究，为进一步阐明药物作用后对于整个性腺轴的正负反馈机制的影响提供了实验依据。实验首先进行了YFN有效成分的初步研究；随后采用16-18个月龄自然老化的SD雌鼠模型，随机分为老年对照组、阳性对照己烯雌酚片组、YFN高剂量组、YFN低剂量组，另选3~4月龄大鼠作青年对照组，每组6只，连续灌胃给药6周后采集标本；采用原代培养卵巢颗粒细胞，使用含药血清培养后采集标本；采用经典药理及分子生物学等研究方法进行各项指标检测。结果显示YFN富含与提高机体免疫力和抗氧化有关的成分；其中雌二醇含量为匹克级，其含量远低于单纯雌激素治疗PMS的用量和阳性对照组用药量。YFN对改善衰老大鼠的一般体征，恢复动情周期，调节外周血性激素分泌，提高卵巢、子宫的脏器指数，延缓衰老引起的大鼠生殖器官的萎缩退变均有积极作用。YFN能够通过增强和活化阻断自由基反应的酶系统，分解过氧化物，使自由基对组织的氧化损伤程度降低，减少组织内持续氧化应激压力。YFN还具有促细胞增殖作用，其调节机体性激素生成作用可能与促进卵巢颗粒细胞生长效应相关；YFN同时可以抑制P21-Rb信号通路，增强BDNF-TrkB信号通路，抑制细胞凋亡。课题组还检测了YFN君药哈蟆油对模型大鼠大脑抗衰老的作用机制，结果显示其可缓解自然衰老雌性大鼠脑部的氧化损伤，使海马组织病理改变程度减轻；p53/p21和BDNF-TrkB信号通路在其中也起到了重要作用。. 结合以往的研究结果： YFN能够升高切除卵巢的模型大鼠血清E2水平，升高子宫、肾上腺指数，调节下丘脑、垂体和血浆β内啡肽、5羟色胺、去甲肾上腺素和多巴胺含量。可以认为YFN作用于围绝经期（生殖衰老）的动物模型后，可通过抗氧化和促细胞增殖、抑制细胞凋亡等作用，直接作用于卵巢，使卵巢功能改善，从而反馈性地作用于下丘脑-垂体-性腺轴的其他靶器官，改善神经内分泌免疫网络功能，调节外周血激素水平，改善围绝经期症状；其作用机制与抗氧化和促进细胞增殖、抑制细胞凋亡有关。