Raf激酶抑制蛋白表达下调/缺失促鼻咽癌转移的作用及其机制研究

我们前期工作采用蛋白质组学技术比较鼻咽癌(NPC)组织与癌旁正常鼻咽上皮组织蛋白质表达谱的差异，筛选NPC相关蛋白质。结果发现：Raf 激酶抑制蛋白(RKIP)表达下调/缺失与NPC转移密切相关。为揭示RKIP表达下调/缺失促NPC转移的作用及其机制，项目首先建立RKIP表达改变的NPC细胞系；再以建立的细胞系为样本，分析RKIP表达改变对NPC细胞体外和体内侵袭转移能力的影响，以及RKIP表达改变对NPC细胞Raf-1/MEK/ERK和NF-kappaB信号通路活性的影响及其与NPC侵袭转移的关系；最后采用靶向蛋白质组学分离鉴定NPC细胞中RKIP的互作蛋白，并采用生物信息学解析其生物学意义，以发现RKIP的互作蛋白网络和涉及的信号通路。项目研究不仅有助于揭示RKIP表达下调/缺失促NPC转移的作用及其机制，而且能为RKIP作为NPC的转移抑制基因以及防治NPC转移的靶标提供科学依据。

我们前期的鼻咽癌(NPC)比较蛋白质组学研究结果发现：Raf 激酶抑制蛋白(RKIP)表达下调/缺失与NPC侵袭转移密切相关，可能是NPC的转移抑制蛋白，但RKIP表达下调/缺失促进NPC侵袭转移的作用及其机制需要进一步阐明。为此，本项目开展RKIP表达下调/缺失促进NPC侵袭转移的作用及其机制研究。主要结果如下：(1)建立了RKIP表达上调的5-8F NPC细胞系以及RKIP表达下调的6-10B NPC细胞系；(2)上调RKIP表达水平能降低5-8F细胞的体外迁移、侵袭、黏附和降解细胞外基质的能力，下调RKIP表达水平能增加6-10B细胞的体外迁移和侵袭能力；(3)裸鼠尾静脉注射癌细胞分析RKIP表达改变对NPC细胞体内转移的影响。结果显示，上调RKIP表达降低5-8F细胞转移到肺脏的能力，下调RKIP表达增强6-10B细胞转移到肺脏的能力；(4)以建立的RKIP表达改变的NPC细胞系为样本，分析RKIP表达改变对Raf-1/MEK/ERK和NF-kappaB信号通路活性的影响及其与NPC细胞侵袭转移的关系。结果显示，上调RKIP表达抑制5-8F细胞Raf-1/MEK/ERK和NF-kappaB信号通路的活性，下调RKIP表达增加6-10B细胞Raf-1/MEK/ERK和NF-kappaB信号通路的活性，即RKIP表达水平与NPC细胞Raf-1/MEK/ERK和NF-kappaB信号通路的活性负相关；另外，RKIP表达下调可通过活化Raf-1/MEK/ERK和NF-kappaB两条信号通路增加6-10B鼻咽癌细胞的体外侵袭能力；(5)以建立的RKIP表达上调的5-8F NPC细胞系为样本，采用靶向蛋白质组学方法(抗RKIP抗体免疫共沉淀结合质谱分析)分离、鉴定RKIP的互作蛋白质，共鉴定了25个RKIP的互作蛋白质，为进一步研究RKIP的作用机制奠定了基础。. 本项目研究结果表明，RKIP表达下调/缺失促进NPC的侵袭和转移；RKIP表达下调/缺失通过激活Raf-1/MEK/ERK和NF-kappaB两条信号通路促进NPC的侵袭和转移；RKIP是潜在的NPC转移抑制蛋白。