Let-7d介导DNA甲基化转录调控多巴胺D3受体参与高血压发病的机制研究

肾脏多巴胺D3受体（DRD3）通过抑制尿钠重吸收参与机体血压调控，DRD3表达下调导致其功能降低参与高血压发病，但DRD3下调机理尚不明确。有证据显示在神经组织let-7d抑制DRD3蛋白及mRNA表达，提示高血压肾脏let-7d上调可能是DRD3表达下降的原因，但单用转录后机制难以满意解释let-7d对DRD3的调控。基因分析显示DRD3启动子区域存在多个与let-7d"种子"互补的序列并富含易发生甲基化的CpG，预实验发现高血压肾脏DRD3启动子区域甲基化水平升高，因此我们推测：let-7d通过互补结合介导DRD3启动子区域DNA甲基化（即RNA介导的DNA甲基化）进而在转录水平抑制DRD3表达。本研究将利用nuclear run－on、甲基化PCR等实验手段，从microRNA介导DNA甲基化这一新角度探索let-7d转录调控DRD3表达的机制，为阐明高血压的发病机理提供新思路。

为了阐明let-7d对DRD3的调控以及其具体机制，本课题从以下几方面展开研究：明确let-7d对DRD3的调节作用发生在转录或转录后水平；let-7d对DRD3的调节作用的具体机制。主要结果如下：.1、.let-7d抑制DRD3 蛋白和mRNA表达；.2、.let-7d对DRD3的调节作用与转录后机制相关；.3、.let-7d mimics对DRD3的调节与let-7d介导的DRD3启动子甲基化相关；.4、.let-7d mimics对DRD3的调节与Ago2 蛋白相关.5、.let-7d mimics对DRD3的调节与DNMT1及DNMT3b相关.本课题研究了let-7d对DRD3的调节及其具体相关机制，初步认为let-7d可能通过Ago2以及DNMT1及DNMT3b街道DRD3启动子甲基化进而调节DRD3表达，是miRNA调节基因表达的有益探索，为高血压的防治提供了新的理论支持和思路。