Breg细胞参与HBV慢性感染的疾病进展及其机制初探

Low CTL reponses to HBV greatly contributed to the persistent hepatitis B, which may lead to the development of liver cirrhosis. Bregs is difined as one functional B cell subsets, which produce the interleukin-10(IL-10) and play a immune regulatory function after the antigen simulation. Accordingly, here is no unique exclusively indentifies the Breg, therefore, B cell must be shown to be suppressive in vivio or in vitro before they can earn the title of Breg, which the chief mechanism of suppression is via the release of IL-10,learding to the suppression of Th1,Th17 reponses, and TNF-α from monocytes. Bregs can also inhibit CTL, thereby impairing effective clearance of tumors. Our previous research showed the Breg may contribute to the chronic hepatitis B (CHB) progression. The possible mechanism is that during the CHB phase, bregs can suppress HBV-specific-cell by IL-10 manners, thereby impairing effective clearance of virus, however during liver cirrhosis (LC), the defect of the Bregs occurs following the overstimulation of bregs leading to exhaustion and/or loss of their suppressive and regulatory function, which Increase liver immune pathological damage, contribute to the liver fibrosis. In our current research we need to elucidate the mechanism by the methods of ELISA，MACS，FCM，ICCS,CFSE and signaling pathway phosphoprotein chip, which provide a new target for the immunization treatment of HBV.

HBV-spesific-CTL在HBV持续性感染中的低反应性是影响HBV慢性化的重要因素，后者又是疾病进展至肝硬化的重要原因。Breg细胞是指一群在接受抗原刺激信号后，分泌IL-10或者具有抑制其他免疫细胞的功能一群功能性B细胞（主要B10细胞）。这群细胞没有能鉴定出特异性转录因子，也无特定表面标志物。团队前期研究表明Breg细胞有可能参与HBV感染疾病进展。其机制可能慢乙肝阶段Breg通过IL-10下调HBV-specific及no- specific-CTL细胞的功能，在肝硬化阶段Breg细胞由于病毒抗原长期刺激，表现出过疲劳，对CTL功能抑制作用减弱，促进了CTL对肝脏细胞的免疫损伤，加速肝脏纤维化进展。本研究通过ELISA，MACS，FCM，ICCS及CFSE及蛋白芯片等方法进一步明确Breg细胞的表面标志物及参与疾病进展可能机制，为HBV免疫治疗提供新靶点。

目的 抗病毒免疫功能缺损是慢性 HBV 感染的重要原因。HBV 慢性感染介导的免疫应答主要是 T 细胞免疫, 其中CD8+细胞是最重要的效应细胞。有研究表明 人体内分泌白细胞介素—10（IL-10）的 CD5+ B 细胞是一组具有免疫调节功能的细胞。本研究主要探讨 CD5+CD19+ B细胞在体外是否为一组免疫调节细胞, 以及它们在 HBV 感染进展中对 CD8+细胞产生的作用及其机制。.方法 提取23个慢性乙型肝炎（CHB）患者, 18个肝硬化（LC）患者和19个正常人（NC）的外周血单个核细胞(PBMC)，用荧光抗体APC-CD5/FITC-CD19标记，并用流式细胞学分析。在加入PMA、离子霉素（ionomycin） 和 LPS 刺激培养 48 h 之后, 将PBMC破膜并用荧光抗体 APC-IL-10 染色，流式下检测细胞内IL-10的表达。ELISA 法检测PBMC上清中的IL-10。PBMCs在剔除或没有剔除CD5+CD19+B细胞的条件下, 在加入PMA、离子霉素（ionomycin） 和 LPS 刺激培养48 h之后, 并在在破膜前后分别用荧光抗体 APC-CD8和PE-IFN-γ 染色，流式下检测IFN-γ+CD8+细胞的表达。肝组织经过脱水和石蜡包埋处理后,进行石蜡切片, 脱蜡至水, 然后进行抗原修复和抗体染色, 并在显微镜下观察。.结果 LC 组 CD5+CD19+ B细胞比率高于CHB组和 NC 组。在 CD5+CD19+ B细胞剔除的条件下刺激培养后, 分泌IFN-γ的CD8+ 细胞的比例上升, 加入IL-10受体拮抗剂后, IFN-γ的CD8+ 细胞的比例又减小。免疫组化结果表明, CD4+和CD8+在肝脏汇管区强表达, 而CD5+和CD19+则相对很少。.结论 CD5+CD19+ B细胞在体外具有分泌 IL-10的功能。这些细胞通过 IL-10 体外对 CD8 细胞有免疫调节作用，但在体内是否仍对CD8+细胞产生作用需要进一步明确。并且, 由于其在肝组织中的表达低，这群细胞对CD8细胞的抑制作用可能是在外周血发挥作用的。