树突状细胞功能、发育环境与疫苗接种失败及HBV慢性感染发生机制研究

本课题主要研究HBV阳性母亲所生的不同HBeAg状态(阳性和阴性)生新生儿静脉和脐带血pDC分布频数、功能分子的表达及IFN-a的分泌能力；探讨HBV蛋白(HBeAg和HBsAg)对免疫细胞分化和功能的影响，pDC对病毒蛋白吞噬能力的变化，HBsAg对pDC功能的直接和间接作用，对pDC数量和成熟的影响，阐明新生儿免疫细胞功能的基础状态；HBeAg的存在对免疫环境特别是pDC分化和成熟及功能的影响及其相关因素，及其机制；HBsAg单独和HBeAg存在时刺激pDC功能的变化与乙肝疫苗接种的应答相关性，导致HBV母婴传播阻断失败的因素和机制。阐明免疫功能特别是pDC功能变化与HBV慢性感染发生的作用和关键因子。为有效的新生儿乙肝疫苗接种和HBV母婴传播的阻断、慢性HBV感染患者的治疗奠定基础。

我国为慢性乙型肝炎病毒感染高流行地区，HBV感染的慢性化是HBV与宿主免疫相互作用的结果，其中以浆样树突状细胞（pDC）的功能最为重要，pDC功能低下是慢性乙型肝炎病毒感染的关键因素，研究pDC功能及其发育环境对阐明HBV感染慢性机制有重要意义。.　　本课题在前期工作基础上对HBV感染母亲所生新生儿脐带血中包括pDC、NK细胞和Treg细胞基础状态的频数，pDC功能分子（CD80/CD83/CD86、TLR-9的表达和IFN-α的分泌）进行了研究，并在体外常规培养基环境培养脐带血单核细胞(CBMC)和全血培养条件下，与健康成年人、慢性乙型肝炎患者和急性乙型肝炎恢复人群相比较，分别研究了HBV蛋白（HBeAg和HBsAg）及CpG刺激培养下，pDC功能的变化、凋亡和IFN-α分泌，比较HBsAg、HBeAg和CpG对免疫细胞的刺激能力。研究结果显示，无论是对全血中还是分离的CBMC和PBMC进行检查，均显示新生儿的pDC、NK细胞和Treg细胞频数，且CD83、CD86阳性细胞全、TLR-9的表达也低于均低于健康成年人、慢性乙型肝炎患者和急性乙型肝炎恢复人群。.　　在体外全血培养或对CBMC和PBMC培养，HBsAg、HBeAg和CpG刺激培养均可显著刺激pDC功能分子的表达，刺激能力以HBeAg＞HBsAg＞CpG。在CBMC和PBMC培养中，新生儿pDC对刺激培养的反应与成年人显示，CD80、CD83和CD86分子的表达无差异。不同HBV感染状态母亲所生新生儿组间的pDC频数及功能分子的表达，NK细胞和Treg细胞无差异。.　　在全血培养中，新生儿脐血全血体外刺激试验结果发现经HBsAg、HBeAg、HBsAg+HBeAg刺激后，pDC表面CD80、CD83、CD86以及TLR-9表达均较未刺激组明显增加。经HBsAg+HBeAg联合刺激后脐血pDC表面分子的表达增加幅度均高于HBsAg组；HBeAg刺激后CD80、CD83、TLR-9的表达增加幅度均高于HBsAg刺激组，CPG刺激后pDC表面CD80、CD83、TLR-9表达增加幅度均低于其他刺激组。与CMBC和PBMC培养不同，虽然HBsAg、HBeAg、HBsAg+HBeAg刺激后新生儿pDC表面CD80、CD83和CD86表达显著增加，但其增加幅度显著低于成年人群，特别是低于急性乙肝恢复者。